基本信息?
?中文名稱?:RNA快速提取試劑盒
貨號(hào):P-PR1479
規(guī)格:50T、100T
?英文名稱?:Rapid RNA Extraction Kit
作用機(jī)制:采用裂解液迅速裂解細(xì)胞或組織,釋放RNA,再通過(guò)吸附柱或磁珠特異性結(jié)合RNA,去除蛋白質(zhì)、DNA、多糖等雜質(zhì),最后用洗脫液獲得純凈的RNA,整個(gè)流程耗時(shí)短。
適用樣本:培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮或凍存組織、血液、植物組織等。
產(chǎn)品概述
RNA快速提取試劑盒專(zhuān)為快速、高效提取各類(lèi)樣本中的總RNA設(shè)計(jì),采用獨(dú)特裂解體系與硅膠膜純化技術(shù),可在短時(shí)間內(nèi)獲得高純度、完整性好的RNA,滿足反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、基因芯片、Northern雜交等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)需求。
試劑盒組成
(以50次提取裝為例)
組分 規(guī)格
裂解液A 100mL
裂解液B 50mL
吸附柱(帶收集管) 50套
通用洗柱液 100mL
RNA洗脫液 20mL
使用說(shuō)明書(shū) 1份
產(chǎn)品特點(diǎn)
極速提?。横槍?duì)不同樣本類(lèi)型,最快可在5-25分鐘內(nèi)完成提取流程,大幅提升實(shí)驗(yàn)效率。
高純度高完整性:提取的RNA OD???/OD???比值達(dá)1.9~2.2,無(wú)DNA殘留,完整性良好,可直接用于各類(lèi)下游實(shí)驗(yàn)。
廣譜適用性:適用于動(dòng)物組織、植物材料、培養(yǎng)細(xì)胞、微生物、全血、病毒液等多種樣本類(lèi)型,尤其針對(duì)多糖/多酚類(lèi)復(fù)雜植物樣本優(yōu)化,解決常規(guī)試劑盒提取失敗難題。
安全環(huán)保:無(wú)需酚/氯仿等有毒有機(jī)試劑抽提,操作過(guò)程更安全,減少環(huán)境污染。
靈活便捷:支持批量樣本處理,也可針對(duì)微量樣本優(yōu)化提取流程,適配不同實(shí)驗(yàn)需求。
性能參數(shù)
RNA產(chǎn)量:每100mg動(dòng)物組織/200mg植物組織可獲得10-50μg總RNA(因樣本類(lèi)型差異有所波動(dòng))。
保存期限:試劑盒常溫(15-25℃)干燥避光保存,有效期12個(gè)月;提取的RNA在-80℃可長(zhǎng)期保存。
適用實(shí)驗(yàn):RT-PCR、熒光定量PCR、Northern雜交、mRNA純化、體外翻譯、基因芯片、二代測(cè)序等。
操作步驟
動(dòng)物組織/培養(yǎng)細(xì)胞提取流程
樣本處理
培養(yǎng)細(xì)胞:離心收集1×10?-1×10?個(gè)細(xì)胞,棄上清,用1mL冰PBS重懸后再次離心,徹底去除上清。
動(dòng)物組織:取10-100mg新鮮或液氮凍存組織,加入1mL裂解液A,用勻漿器勻漿或液氮研磨至無(wú)明顯塊狀。
裂解:向樣本中加入1mL裂解液A,劇烈渦旋振蕩30秒,室溫放置5分鐘,確保樣本充分裂解。
分離上清:將裂解液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管,12000rpm室溫離心5分鐘,吸取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管。
結(jié)合吸附柱:向上清液中加入等體積裂解液B,輕輕顛倒混勻,將混合液分次加入吸附柱,12000rpm室溫離心30秒,棄收集管中廢液。
洗滌:向吸附柱中加入500μL通用洗柱液,12000rpm室溫離心30秒,棄廢液;重復(fù)此步驟1次。
干燥吸附柱:將吸附柱放回收集管,12000rpm室溫離心2分鐘,徹底去除殘留洗柱液。
洗脫RNA:將吸附柱放入新的1.5mL離心管,向吸附膜中央加入30-50μL RNA洗脫液(可提前預(yù)熱至65℃),室溫放置2分鐘,12000rpm室溫離心2分鐘,收集洗脫液即為純化的RNA。
植物組織(含多糖/多酚類(lèi))提取流程
樣本處理:取50-200mg新鮮或液氮凍存植物組織,加入1mL裂解液A,液氮研磨成細(xì)粉后轉(zhuǎn)移至離心管,劇烈渦旋振蕩30秒。
裂解與除雜:室溫放置5分鐘,12000rpm室溫離心10分鐘,吸取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管(避免吸取沉淀)。
基因組DNA清除:向上清液中加入0.5倍體積的無(wú)水乙醇,輕輕混勻后加入基因組DNA清除柱,12000rpm室溫離心30秒,收集穿透液。
RNA結(jié)合:向穿透液中加入0.5倍體積的無(wú)水乙醇,輕輕混勻后加入RNA吸附柱,12000rpm室溫離心30秒,棄廢液。
洗滌:向吸附柱中加入500μL通用洗柱液,12000rpm室溫離心30秒,棄廢液;重復(fù)此步驟1次。
干燥與洗脫:同動(dòng)物組織提取流程步驟6-7,洗脫獲得純化RNA。
全血樣本提取流程
白細(xì)胞分離:取2-3mL抗凝全血,緩慢加入到3mL淋巴細(xì)胞分離液上層,1500rpm室溫離心15分鐘,小心吸取中間白細(xì)胞層至新離心管。
細(xì)胞洗滌:加入等量生理鹽水,4000rpm室溫離心2分鐘,棄上清,收集白細(xì)胞沉淀。
裂解與純化:向白細(xì)胞沉淀中加入1mL裂解液A,渦旋振蕩至徹底重懸,后續(xù)操作同動(dòng)物組織提取流程步驟3-7。
儲(chǔ)存條件
試劑盒需置于室溫(15-25℃)、干燥、避光環(huán)境下密封保存,避免凍融;裂解液A若出現(xiàn)低溫沉淀,使用前需65℃水浴溶解并搖勻。
注意事項(xiàng)
本產(chǎn)品僅用于科研或工業(yè)應(yīng)用,不可用于臨床診斷或治療。
操作全程需在無(wú)RNase污染環(huán)境中進(jìn)行,佩戴手套、口罩,使用無(wú)RNase的槍頭、離心管等耗材。
若不慎接觸皮膚或眼睛,需立即用大量清水沖洗,必要時(shí)尋求醫(yī)療幫助。
樣本處理需盡量快速,避免RNA降解;提取的RNA建議立即用于實(shí)驗(yàn)或分裝后-80℃凍存。
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