基本信息?
產品名稱 | Endonuclease IV | 貨號 | P-PR1364 |
規(guī)格 | 1000U、5000U | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Endonuclease IV
作用機制：一種DNA內切酶，可特異性切割DNA鏈上的AP位點（無嘌呤或無嘧啶位點），同時具有3'磷酸酶活性，可去除DNA鏈3'末端的磷酸基團，參與DNA損傷修復過程。
適用樣本：含有AP位點的DNA樣本，可用于DNA損傷修復機制研究、DNA修飾分析等實驗。
產品概述
該酶是一種DNA損傷修復相關的核酸內切酶，主要功能是切割DNA雙鏈上的AP位點（無嘌呤/無嘧啶位點），也可氧化損傷的嘧啶堿基位點進行切割。它在DNA堿基切除修復通路中發(fā)揮關鍵作用，能識別并處理多種DNA損傷，為研究DNA損傷與修復機制、篩選DNA修復相關藥物等提供重要工具，也可用于體外構建特定的DNA損傷模型。
產品特點
AP位點特異性：專門識別并切割DNA上的無嘌呤/無嘧啶位點
損傷修復研究：是研究堿基切除修復通路的關鍵工具酶
低序列偏好性：對AP位點周圍的堿基序列無明顯選擇性
熱穩(wěn)定性：37℃孵育1小時后仍保留90%以上活性
操作步驟
一、試劑預處理
取出洗滌液Ⅰ和洗滌液Ⅱ濃縮液，按試劑瓶標注比例加入無水乙醇，充分混勻后備用
將洗脫液置于65℃水浴鍋中預熱
二、水樣處理與核酸富集
取10mL預處理后的水樣（雜質較多的水樣需先經(jīng)0.45μm濾膜過濾）加入50mL潔凈燒杯
依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分攪拌混勻
將燒杯置于65℃水浴中孵育15分鐘，期間每隔5分鐘攪拌一次
三、核酸純化與洗脫
向燒杯中加入15mL異丙醇，充分攪拌混勻后，將混合液轉移至連接富集吸附柱的50mL注射器針筒內
靜置2分鐘后，開啟真空抽濾裝置，將液體緩慢抽濾至富集吸附柱內（注意不要抽干）
向針筒內加入5mL洗滌液Ⅰ，靜置2分鐘后抽濾；再加入5mL洗滌液Ⅱ，靜置2分鐘后抽濾，重復洗滌液Ⅱ步驟1次
取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常溫離心3分鐘，去除殘留洗滌液
將吸附柱轉移至新的收集管，加入50-100μL預熱的洗脫液，靜置2分鐘后12000rpm離心2分鐘
收集管中的液體即為純化后的病毒核酸，可直接用于下游實驗或-70℃保存
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注意事項
試劑保存：試劑盒應避光保存于2-8℃，有效期12個月；核酸富集因子避免反復凍融，使用后立即放回冰箱
水樣預處理：高濁度或雜質過多的水樣，需先經(jīng)0.45μm濾膜過濾，避免堵塞吸附柱
操作規(guī)范：實驗全程佩戴手套、口罩、護目鏡等防護用品，避免直接接觸水樣與試劑；若不慎接觸皮膚或眼睛，立即用大量清水沖洗
試劑配制：洗滌液需現(xiàn)用現(xiàn)配，按比例加入無水乙醇后充分混勻，未使用的稀釋液可在2-8℃保存1個月
核酸保存：提取的核酸若長期保存，需置于-70℃環(huán)境，避免反復凍融；短期可在4℃保存24小時
器材要求：所有實驗器材需為無RNA酶耗材，實驗前可經(jīng)180℃干烤6小時或用RNA酶清除劑處理
關鍵字： Endonuclease IV;
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