基本信息?
產品名稱 | Tte AP 熱穩(wěn)定核酸酶 | 貨號 | P-PR1357 |
規(guī)格 | 1000U、5KU | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Tte AP Thermostable Nuclease
作用機制：一種熱穩(wěn)定型堿性磷酸酶，可去除DNA或RNA鏈末端的磷酸基團，在高溫下仍能保持活性，常用于去除核酸樣本中的磷酸基團，防止自連，或用于核酸標記、測序等實驗前的樣本處理。
適用樣本：DNA或RNA樣本，可用于核酸片段去磷酸化、核酸標記前處理、測序樣本純化等實驗。
產品概述
這是一種極端熱穩(wěn)定的堿性磷酸酶，來源于嗜熱菌Thermus thermophilus，能夠催化去除DNA、RNA、核苷酸等分子的5'磷酸基團。憑借出色的熱穩(wěn)定性，它可在高溫條件下保持活性，適用于需要高溫處理的實驗，如PCR產物的去磷酸化以防止自連、基因克隆中載體的去磷酸化處理等，能有效提升實驗的特異性和成功率。
產品特點
極端熱穩(wěn)定性：源自嗜熱菌，95℃高溫下仍保持高效活性
去磷酸化功能：催化去除DNA、RNA和核苷酸的5'-磷酸基團
防自連應用：PCR產物和載體去磷酸化，防止載體自連，提高克隆效率
兼容性強：適用于各種分子克隆實驗體系，無序列特異性
核心PCR試劑及使用方法
1. Taq DNA聚合酶
作用：催化DNA鏈的延伸，是PCR反應的核心酶
使用方法：
通常按0.5-2U/25μL體系添加，具體用量參照試劑說明書
酶對溫度敏感，需在冰上操作，避免反復凍融
最后加入酶液，防止提前激活導致非特異性擴增
2. dNTP混合液
作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）
使用方法：
終濃度一般為200μmol/L每種dNTP，總濃度800μmol/L
避免反復凍融，可分裝成小體積儲存
注意pH值，過酸或過堿會抑制聚合酶活性
3. PCR緩沖液
作用：提供酶促反應的適宜環(huán)境（pH、離子濃度）
使用方法：
通常為10×濃度，使用時稀釋至1×終濃度
含Mg2+的緩沖液需注意Mg2+濃度，一般1.5-2.5mmol/L為最優(yōu)范圍
部分緩沖液含KCl、Tris-HCl等成分，無需額外添加
4. 引物（上游/下游）
作用：定位擴增區(qū)域，引導DNA合成起始
使用方法：
終濃度一般為0.1-1μmol/L，根據引物Tm值調整
引物需用TE緩沖液或無菌水溶解，濃度計算準確
避免引物降解，-20℃分裝儲存，避免反復凍融
5. 模板DNA
作用：提供擴增的原始DNA模板
使用方法：
模板濃度一般為1ng-1μg/25μL體系，根據模板類型調整
基因組DNA需充分純化，避免蛋白、RNA等雜質污染
質粒DNA可適當減少用量，一般10-100ng即可
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實驗流程
反應體系配制：按1×工作濃度混合預混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及無核酸酶水。
PCR程序：
預變性：95℃ 30 sec
擴增循環(huán)（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（熒光采集）
熔解曲線分析：60-95℃梯度升溫。
注意事項
避免反復凍融，推薦分裝保存。
熔解曲線需呈現單一峰以確保擴增特異性。
若需絕對定量，建議配套標準品使用。
關鍵字： Tte AP 熱穩(wěn)定核酸酶;Tte AP Thermostable ;
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