基本信息?
產(chǎn)品名稱(chēng) | 熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(HL dsDNase) | 貨號(hào) | P-PR1351 |
規(guī)格 | 100U、1000U | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱(chēng)?：Thermolabile Double-Strand DNA Specific Nuclease (HL dsDNase)
作用機(jī)制：一種熱敏型雙鏈DNA特異性核酸酶，在常溫下可特異性降解雙鏈DNA，對(duì)單鏈DNA、RNA或RNA-DNA雜合鏈無(wú)作用，在高溫下（如65℃）會(huì)快速失活，可用于去除樣本中的雙鏈DNA污染。
適用樣本：含有雙鏈DNA污染的RNA樣本、蛋白樣本等，可用于RNA純化、蛋白純化等實(shí)驗(yàn)，尤其適合對(duì)熱敏感的樣本處理。
產(chǎn)品概述
這是一種具有熱敏特性的雙鏈DNA特異性核酸酶，能夠在適宜溫度下特異性降解雙鏈DNA，而對(duì)單鏈DNA、RNA和蛋白質(zhì)無(wú)作用，且在高溫條件下可迅速失活。它可用于去除RNA樣品中的雙鏈DNA污染、構(gòu)建DNA文庫(kù)時(shí)去除多余的雙鏈DNA片段等實(shí)驗(yàn)，熱敏特性使其在實(shí)驗(yàn)中易于控制反應(yīng)的進(jìn)行與終止，提升實(shí)驗(yàn)的靈活性。
產(chǎn)品特點(diǎn)
雙鏈特異性：僅降解雙鏈DNA，對(duì)單鏈DNA和RNA無(wú)活性
熱敏可逆性：低溫下保持活性，高溫（65℃以上）快速失活
模板清除工具：用于去除RNA樣品中的雙鏈DNA污染，提高RNA純度
反應(yīng)條件溫和：最適溫度37℃，反應(yīng)時(shí)間可靈活控制
核心PCR試劑及使用方法
1. Taq DNA聚合酶
作用：催化DNA鏈的延伸，是PCR反應(yīng)的核心酶
使用方法：
通常按0.5-2U/25μL體系添加，具體用量參照試劑說(shuō)明書(shū)
酶對(duì)溫度敏感，需在冰上操作，避免反復(fù)凍融
最后加入酶液，防止提前激活導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增
2. dNTP混合液
作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）
使用方法：
終濃度一般為200μmol/L每種dNTP，總濃度800μmol/L
避免反復(fù)凍融，可分裝成小體積儲(chǔ)存
注意pH值，過(guò)酸或過(guò)堿會(huì)抑制聚合酶活性
3. PCR緩沖液
作用：提供酶促反應(yīng)的適宜環(huán)境（pH、離子濃度）
使用方法：
通常為10×濃度，使用時(shí)稀釋至1×終濃度
含Mg2+的緩沖液需注意Mg2+濃度，一般1.5-2.5mmol/L為最優(yōu)范圍
部分緩沖液含KCl、Tris-HCl等成分，無(wú)需額外添加
4. 引物（上游/下游）
作用：定位擴(kuò)增區(qū)域，引導(dǎo)DNA合成起始
使用方法：
終濃度一般為0.1-1μmol/L，根據(jù)引物Tm值調(diào)整
引物需用TE緩沖液或無(wú)菌水溶解，濃度計(jì)算準(zhǔn)確
避免引物降解，-20℃分裝儲(chǔ)存，避免反復(fù)凍融
5. 模板DNA
作用：提供擴(kuò)增的原始DNA模板
使用方法：
模板濃度一般為1ng-1μg/25μL體系，根據(jù)模板類(lèi)型調(diào)整
基因組DNA需充分純化，避免蛋白、RNA等雜質(zhì)污染
質(zhì)粒DNA可適當(dāng)減少用量，一般10-100ng即可
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實(shí)驗(yàn)流程
反應(yīng)體系配制：按1×工作濃度混合預(yù)混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及無(wú)核酸酶水。
PCR程序：
預(yù)變性：95℃ 30 sec
擴(kuò)增循環(huán)（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（熒光采集）
熔解曲線分析：60-95℃梯度升溫。
注意事項(xiàng)
避免反復(fù)凍融，推薦分裝保存。
熔解曲線需呈現(xiàn)單一峰以確保擴(kuò)增特異性。
若需絕對(duì)定量，建議配套標(biāo)準(zhǔn)品使用。
關(guān)鍵字： 熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(HL dsD;Thermolabile Double-;
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