基本信息?

?英文名稱?：SUMO Protease
作用機(jī)制：特異性識(shí)別并切割SUMO標(biāo)簽與目標(biāo)蛋白之間的連接位點(diǎn)，去除SUMO標(biāo)簽，獲得天然的目標(biāo)蛋白質(zhì)，常用于提高重組蛋白的溶解性和穩(wěn)定性后，去除標(biāo)簽以獲得天然蛋白。

適用樣本：適用于帶有SUMO標(biāo)簽的重組蛋白的純化后處理，樣本為經(jīng)過(guò)親和層析純化的SUMO標(biāo)簽融合蛋白溶液。
產(chǎn)品概述
SUMO蛋白酶是一類特異性識(shí)別SUMO（小泛素樣修飾物）標(biāo)簽并進(jìn)行切割的蛋白酶，在重組蛋白表達(dá)純化中用于去除SUMO融合標(biāo)簽。SUMO標(biāo)簽?zāi)苡行г鰪?qiáng)重組蛋白的可溶性、促進(jìn)蛋白正確折疊、保護(hù)蛋白免受蛋白酶水解并提高穩(wěn)定性，尤其適用于難表達(dá)或易降解蛋白的表達(dá)。SUMO蛋白酶可精準(zhǔn)識(shí)別SUMO標(biāo)簽與目的蛋白之間的特異性序列位點(diǎn)進(jìn)行切割，切割后目的蛋白僅保留少量氨基酸殘基（或無(wú)殘留），最大程度還原蛋白天然結(jié)構(gòu)與功能。切割后的SUMO標(biāo)簽及蛋白酶可通過(guò)親和層析等方法去除，獲得高純度的目的蛋白，廣泛應(yīng)用于蛋白結(jié)構(gòu)研究、功能分析及工業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域。
產(chǎn)品特點(diǎn)
結(jié)構(gòu)特異性識(shí)別：不依賴線性氨基酸序列，特異性識(shí)別SUMO標(biāo)簽的三級(jí)結(jié)構(gòu)，切割后目的蛋白N端無(wú)殘留氨基酸。

廣譜反應(yīng)條件：在4-30℃、pH5.5-9.5范圍內(nèi)保持高活性，可耐受0-1M NaCl、0-2M脲等試劑，適配復(fù)雜樣品。

高酶切效率：酶與底物比例1:100即可實(shí)現(xiàn)高效切割，4℃過(guò)夜反應(yīng)即可完成，不破壞目的蛋白結(jié)構(gòu)。

便捷去除：自身帶6×His標(biāo)簽，反應(yīng)后可通過(guò)Ni-NTA樹脂去除，簡(jiǎn)化純化流程。
操作步驟

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

向漂洗液1中加入60mL無(wú)水乙醇，向漂洗液2中加入45mL無(wú)水乙醇，充分混勻后標(biāo)記

載體RNA溶液配制：向300μg載體RNA凍干粉中加入300μL無(wú)酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分裝后-20℃保存

將冷凍樣本置于室溫解凍，輕輕顛倒混勻后備用

二、手工提取流程

樣本裂解：取200μL血液樣本至1.5mL離心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解緩沖液，振蕩混勻10秒，室溫孵育10分鐘（每3分鐘顛倒混勻1次）

磁珠結(jié)合：加入15μL磁珠懸浮液（使用前充分振蕩混勻），振蕩混勻10秒，室溫孵育10分鐘（每3分鐘顛倒混勻1次）

磁珠分離：將離心管置于磁力架上，靜置1-2分鐘至磁珠完全吸附，小心吸棄上清液（避免觸碰磁珠）

洗滌純化：

取下離心管，加入500μL漂洗液1，振蕩混勻1分鐘，再次置于磁力架上分離磁珠，吸棄上清

重復(fù)上述操作1次

加入500μL漂洗液2，振蕩混勻1分鐘，置于磁力架上分離磁珠，吸棄上清

重復(fù)上述操作1次

干燥磁珠：保持離心管在磁力架上，室溫晾干5-10分鐘（確保乙醇完全揮發(fā)，避免過(guò)度干燥）

核酸洗脫：加入100-200μL洗脫緩沖液，振蕩混勻后56℃孵育5分鐘，置于磁力架上分離磁珠，上清液即為提取的核酸

公司正在出售的產(chǎn)品

注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)操作需在潔凈環(huán)境中進(jìn)行，佩戴手套、口罩，避免樣本交叉污染

蛋白酶K需-20℃保存，使用時(shí)避免反復(fù)凍融，可分裝后使用

還原劑需現(xiàn)用現(xiàn)加，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中失效

若毛囊樣本角質(zhì)化嚴(yán)重，可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間或增加還原劑用量

提取的DNA可置于-20℃長(zhǎng)期保存，短期可在4℃儲(chǔ)存

若需提高DNA產(chǎn)量，可將洗脫液重復(fù)洗脫一次吸附柱