基本信息?
產(chǎn)品名稱 | 蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物ABC（100X） | 貨號 | P-PR1337 |
規(guī)格 | 100μlX3 | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail ABC (100X)
作用機制：包含多種蛋白酶抑制劑（如絲氨酸蛋白酶抑制劑、半胱氨酸蛋白酶抑制劑等）和磷酸酶抑制劑，可抑制細胞裂解和蛋白質(zhì)提取過程中蛋白酶和磷酸酶的活性，防止蛋白質(zhì)的降解和去磷酸化，保持蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)和修飾。
適用樣本：適用于各種生物樣本的蛋白質(zhì)提取，如細胞、組織、血清等，用于Western blotting、免疫沉淀、蛋白質(zhì)組學分析等實驗。
產(chǎn)品概述
蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物ABC（100X）是一種廣譜的蛋白保護試劑，用于在細胞裂解、蛋白提取及保存過程中抑制蛋白酶與磷酸酶的活性，維持蛋白的天然結(jié)構(gòu)與修飾狀態(tài)。該混合物包含多種絲氨酸蛋白酶抑制劑、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、天冬氨酸蛋白酶抑制劑以及磷酸酶抑制劑等成分，能同時抑制多種類型的蛋白酶（如胰蛋白酶、胃蛋白酶等）與磷酸酶（如絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶、酪氨酸磷酸酶等）的活性，有效防止蛋白被降解與去磷酸化。使用時按1:100的比例加入細胞裂解液或蛋白樣品中，可廣泛適用于細胞、組織等多種樣本的蛋白提取與保存，為蛋白組學研究、酶活性分析等實驗提供高質(zhì)量的蛋白樣品。
產(chǎn)品特點
廣譜抑制作用：同時抑制絲氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸等各類蛋白酶，以及絲氨酸/蘇氨酸、酪氨酸磷酸酶。
高效保護體系：多種抑制劑協(xié)同作用，全面防止蛋白降解與去磷酸化，保持蛋白天然狀態(tài)。
使用便捷：100X濃縮液，按1:100比例加入裂解液，無需單獨配制多種抑制劑。
兼容性廣：適用于細胞、組織、細菌、酵母等多種樣本的蛋白提取實驗。
操作步驟
樣本處理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取試劑，再加入500μl血清或血漿樣本，漩渦振蕩30秒充分混勻
初步分離：13000rpm離心5分鐘，將上清約1ml轉(zhuǎn)移至新的2ml EP管中，加入1ml異丙醇，上下顛倒混合均勻
柱式吸附：將混合液分三次加入吸附柱（每次約700μl），13000rpm離心15秒，倒掉過柱液
洗滌純化：
向吸附柱中加入700μl 75%異丙醇，13000rpm離心15秒，倒掉過濾液
向吸附柱中加入500μl無水乙醇，13000rpm離心15秒，倒掉過濾液
干燥柱體：吸附柱13000rpm空離心2分鐘，去除殘留乙醇，室溫放置2分鐘使乙醇完全揮發(fā)
RNA洗脫：在吸附柱濾芯中央加入30μl RNase-Free TE緩沖液，室溫靜置2分鐘，13000rpm離心2分鐘，收集濾液即為提取的miRNA產(chǎn)物
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注意事項
樣本處理：
血漿抗凝劑建議使用EDTA或檸檬酸鈉，避免使用肝素（會抑制PCR檢測）
樣本應避免反復凍融，新鮮樣本建議盡快處理
試劑使用：
miRNA提取試劑含有胍鹽，具有強烈腐蝕性，操作時需佩戴防護眼鏡、手套和口罩
自備試劑需確保無RNase污染，避免影響RNA完整性
實驗操作：
所有操作需在無RNase環(huán)境中進行，使用RNase-Free的槍頭和離心管
離心過程需確保離心管蓋緊，避免液體滲漏
產(chǎn)物檢測：
由于血清/血漿中miRNA含量極低，提取產(chǎn)物濃度通常在5ng/μl以下，難以用常規(guī)NanoDrop測量，建議直接取10μl進行下游反轉(zhuǎn)錄實驗
為獲得更可靠數(shù)據(jù)，推薦使用特異性和靈敏度更好的TaqMan探針法進行miRNA定量檢測
產(chǎn)物保存：提取的miRNA產(chǎn)物可立即用于下游實驗，或分裝后置于-80℃長期保存，避免反復凍融
關鍵字： 蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物ABC（100;Protease and Phospha;
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