基本信息?
產(chǎn)品名稱 | T4 DNA Ligase（T4連接酶） | 貨號(hào) | P-PR1231 |
規(guī)格 | 500U | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：T4 DNA Ligase
作用機(jī)制：催化DNA鏈的5'-磷酸基團(tuán)與3'-羥基基團(tuán)之間形成磷酸二酯鍵，可連接粘性末端、平末端的DNA片段，也可修復(fù)雙鏈DNA的缺口，是分子克隆實(shí)驗(yàn)中常用的工具酶。
適用樣本：適用于DNA克隆、載體構(gòu)建、DNA片段連接等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，樣本為限制性內(nèi)切酶酶切后的DNA片段、PCR產(chǎn)物、合成的寡核苷酸等。
產(chǎn)品概述
T4 DNA連接酶是從T4噬菌體感染的大腸桿菌中分離得到的一種DNA連接酶，是分子克隆實(shí)驗(yàn)中最常用的工具酶之一。它能夠催化雙鏈DNA片段末端的5'磷酸基團(tuán)與3'羥基之間形成磷酸二酯鍵，從而將互補(bǔ)的粘性末端或平末端的DNA片段連接起來(lái)。T4 DNA連接酶需要ATP作為能量輔助因子，在合適的緩沖體系中，于16℃（粘性末端）或22℃（平末端）條件下可高效進(jìn)行連接反應(yīng)。它廣泛應(yīng)用于基因克隆、載體構(gòu)建、DNA片段拼接、基因組文庫(kù)構(gòu)建等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，是實(shí)現(xiàn)DNA片段體外重組的關(guān)鍵酶類，為分子生物學(xué)研究提供了不可或缺的技術(shù)支持。
產(chǎn)品特點(diǎn)
經(jīng)典連接工具：分子克隆實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)連接酶，技術(shù)成熟，結(jié)果穩(wěn)定可靠。
廣譜連接能力：可連接粘性末端、平末端、切口DNA，適配各類分子克隆操作。
活性可控：16℃過(guò)夜連接為常規(guī)條件，22℃連接2-3小時(shí)可快速完成反應(yīng)。
經(jīng)濟(jì)性高：價(jià)格低廉，性價(jià)比高，適合大規(guī)模常規(guī)克隆實(shí)驗(yàn)。
操作步驟
.配制反應(yīng)體系：（以25μl體系為例）
組分 體積
10×反應(yīng)緩沖液 2.5μl
MgCl?（25mM） 1.5-2.5μl（根據(jù)模板調(diào)整）
dNTPs（10mM each） 0.5μl
上游引物（10μM） 1μl
下游引物（10μM） 1μl
模板DNA 1-5μl
3173 DNA Polymerase 0.2-0.5μl
ddH?O 補(bǔ)至25μl
.PCR擴(kuò)增：設(shè)置循環(huán)參數(shù) 95℃預(yù)變性3min；95℃變性30s，50-65℃退火30s，72℃延伸（1min/kb），25-35個(gè)循環(huán)；72℃終延伸10min
.產(chǎn)物處理：擴(kuò)增產(chǎn)物需添加Loading Buffer后進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳
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注意事項(xiàng)
試劑預(yù)處理：使用前需按照瓶身標(biāo)簽提示，向漂洗液中加入指定體積的無(wú)水乙醇
沉淀處理：若裂解液、結(jié)合緩沖液出現(xiàn)沉淀，可在37℃水浴中加熱溶解，搖勻后再使用
操作環(huán)境：實(shí)驗(yàn)需在潔凈環(huán)境中進(jìn)行，避免樣本交叉污染；所有離心步驟均在室溫下完成
試劑保存：試劑盒未開封時(shí)，可在15~25℃干燥環(huán)境下保存12個(gè)月；開封后蛋白酶K需置于-20℃保存，避免反復(fù)凍融
安全防護(hù)：若試劑接觸皮膚或黏膜，需立即用大量自來(lái)水沖洗
關(guān)鍵字： T4 DNA Ligase（T4連接酶）;T4 DNA Ligase;
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