Recombinant Human ECRG-2
Recombinant Human ECRG-2（食管癌相關基因2蛋白，即SPINK7）是一種在大腸桿菌或真核系統(tǒng)中表達的高純度重組蛋白，作為絲氨酸蛋白酶抑制劑，主要參與維持上皮屏障穩(wěn)態(tài)及抑制腫瘤進展，廣泛用于食管癌及炎癥性疾病的研究1。
商品介紹：
A-01K101175-50μg | Recombinant Human ECRG-2 |
A-01K101175-200ug | Recombinant Human ECRG-2 |
A-01K101175-1mg | Recombinant Human ECRG-2 |
別稱：ECG2, ECRG-2, Esophagus cancer-related gene 2 protein, ISK7_HUMAN, Serine protease inhibitor Kazal-type 7, SPINK7, UNQ745/PRO1474
標簽：N-terminal His Tag
種屬：Human
宿主：E.Coli
表達區(qū)間：20-85
分子量：7.2 kDa
應用：Western Blot, ELISA
性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
純度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
檢測原理詳解：
包被抗體結合
實驗開始前，微孔板已預先包被抗人白脂素單克隆抗體。當加入待測樣本后，
樣本中的人白脂素（Asprosin）會與固相載體上的捕獲抗體特異性結合。
形成“夾心復合物”
洗滌去除未結合物質后，加入生物素標記的檢測抗體，該抗體與白脂素分子的另一表位結合，
形成“固相抗體—抗原—檢測抗體”三明治結構。
酶促顯色反應
隨后加入?辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，與生物素檢測抗體結合。
最后加入TMB顯色底物，在HRP催化下產生藍色產物，反應終止后變?yōu)辄S色。
濃度定量分析
黃色深淺與樣本中白脂素含量成正比，通過酶標儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），
并根據(jù)標準曲線計算出樣本中白脂素的濃度。
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實驗步驟：
1. 基因克隆與表達載體構建
從人類FBN1基因C端序列中擴增Asprosin編碼片段（約140aa）。
將目的片段插入原核表達載體，確保帶有?N端或C端His標簽，便于后續(xù)純化。
轉化至?感受態(tài)細胞，篩選陽性克隆并測序驗證。
2. 重組蛋白誘導表達
取陽性菌落接種于LB培養(yǎng)基（含氨芐青霉素），37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
次日按1:100比例轉接至新鮮LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至OD600達0.6–0.8。
加入IPTG至終濃度0.1–1.0 mM，16–25℃誘導表達6–12小時（低溫誘導有助于可溶性達）。
4℃、8000×g離心10分鐘收集菌體，棄上清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3. 菌體裂解與蛋白提取
將菌體沉淀重懸于裂解緩沖液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制劑），超聲破碎
（冰浴條件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g離心20分鐘，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵體蛋白）。
若為包涵體蛋白，需用?洗滌緩沖液（含2M尿素的PBS）洗滌2–3次，去除雜蛋白。
4. 親和層析純化（Ni-NTA法）
將含His標簽的蛋白溶液（或溶解后的包涵體蛋白，使用含6–8M尿素的緩沖液溶解）上樣至?Ni-NTA親和層析柱。
用?洗滌緩沖液（含20–40mM咪唑）洗去非特異性結合蛋白。
用?洗脫緩沖液（含250–500mM咪唑）梯度洗脫目標蛋白，收集洗脫峰。
透析去除尿素與咪唑（使用PBS或生理緩沖液，4℃過夜，更換3次）。
5. 蛋白復性（針對包涵體蛋白）
若蛋白以包涵體形式表達，需在純化后進行?梯度復性：
將變性蛋白緩慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的復性緩沖液中，4℃攪拌過夜?；虿捎?透析法?逐步去除變性劑。復性后再次離心取上清，檢測蛋白活性。
關鍵字： ECRG-2;Human;E.Coli;
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