基本信息?
產(chǎn)品名稱 | 血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒 | 貨號 | P-PR1319 |
規(guī)格 | 25T、100TX25μl | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Serum/Plasma TaqMan miRNA Reverse Transcription Kit
作用機制：采用莖環(huán)結(jié)構(gòu)的特異性引物，將血清或血漿中的miRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；試劑盒含優(yōu)化的反應緩沖液與逆轉(zhuǎn)錄酶，可實現(xiàn)miRNA的高效逆轉(zhuǎn)錄，適用于后續(xù)的TaqMan定量PCR檢測。
適用樣本：人或動物血清、血漿樣本中的miRNA逆轉(zhuǎn)錄，適用于疾病診斷、基因調(diào)控研究等實驗。
產(chǎn)品概述
血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒是一款專門用于從血清或血漿樣本中提取microRNA（miRNA）并反轉(zhuǎn)錄為cDNA的試劑盒，結(jié)合TaqMan探針技術(shù)可實現(xiàn)對miRNA的高靈敏定量檢測。血清或血漿樣本中的miRNA含量較低，且存在大量的蛋白、脂質(zhì)等雜質(zhì)，同時RNase活性較高，對miRNA的提取與反轉(zhuǎn)錄造成挑戰(zhàn)。該試劑盒優(yōu)化了miRNA提取與反轉(zhuǎn)錄體系，采用了高效的miRNA提取試劑與特異性反轉(zhuǎn)錄引物，可從血清或血漿樣本中高效提取miRNA，并特異性地將miRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA可直接用于TaqMan miRNA定量PCR檢測，通過實時熒光定量PCR技術(shù)實現(xiàn)對miRNA初始表達量的準確測定。該試劑盒操作簡便，檢測靈敏度高、特異性強，適用于臨床血清或血漿樣本中miRNA的表達分析，為疾病的早期診斷、預后評估、療效監(jiān)測等提供了重要的技術(shù)手段。
產(chǎn)品特點
血清血漿專用：針對血清血漿樣本中miRNA含量低、雜質(zhì)多的特點優(yōu)化，提取效率高。
反轉(zhuǎn)錄特異性強：采用莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA特異性反轉(zhuǎn)錄引物，避免其他RNA的非特異性反轉(zhuǎn)錄。
靈敏度極高：可檢測血清血漿中低至飛摩爾級的miRNA，適合微量miMarker檢測。
定量準確：反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物與TaqMan miRNA定量PCR試劑盒兼容，定量結(jié)果準確可靠。
操作簡便：一站式試劑盒，包含miRNA提取和反轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑，實驗流程簡化。
操作步驟
一、樣本準備
取1-5mL漱口水樣本轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，12000rpm離心10分鐘，棄上清，收集細胞沉淀。
二、細胞裂解
向離心管中加入200~400μL細胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液
渦旋震蕩10秒充分混勻，將離心管放入75℃恒溫震蕩器中，900rpm恒溫震蕩裂解45分鐘
裂解完成后短暫離心，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中
三、DNA吸附
向裂解上清中加入等體積的結(jié)合緩沖液，輕輕顛倒混勻
將混合液全部轉(zhuǎn)移至一次性吸附柱中，12000rpm離心30秒，棄收集管中的廢液
向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm離心30秒，棄廢液；重復此漂洗步驟1次
四、DNA洗脫
將吸附柱放回收集管，12000rpm離心2分鐘，徹底去除殘留漂洗液
將吸附柱轉(zhuǎn)移至新的1.5mL離心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脫緩沖液（可預熱至65℃提升洗脫效率）
室溫靜置2分鐘，12000rpm離心1分鐘，離心管中的液體即為提取完成的基因組DNA
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使用建議
溶解與保存：建議以液體形式保存于-20℃，避免反復凍融。
反應條件：常規(guī)反應溫度為37℃，滅活需50℃處理5分鐘。
推薦用量：根據(jù)實驗體系優(yōu)化，通常每50μL反應體系添加0.1-1U。
關鍵字： 血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試;Serum/Plasma TaqMan ;
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