重組表達原理:
基因克隆?:從?;蚪M中獲取CST3基因的編碼序列(對應氨基酸31–148),插入含有啟動子、篩選標記和His標簽序列的質粒載體。
宿主表達?:將重組質粒轉化至E. coli(如BL21菌株),在IPTG誘導下啟動蛋白表達。該系統(tǒng)成本低、表達效率高,適合大規(guī)模生產。
蛋白純化?:利用His標簽與鎳柱親和層析結合,實現(xiàn)高純度(>95%)蛋白回收,再經透析或凝膠過濾去除雜質。
凍干保存?:加入海藻糖作為保護劑,凍干后可長期穩(wěn)定儲存,復溶后保持天然構象和生物活性。
操作要點:
電泳條件?:使用15% SDS-PAGE凝膠,以提高對小分子量蛋白(~13.4 kDa)的分辨率。
轉膜參數(shù)?:采用濕轉法,100 V、60–90分鐘(4°C),使用PVDF膜(需甲醇預活化)。
抗體選擇?:
一抗:抗CST3多克隆抗體(如兔源抗體),推薦稀釋比為1:1000。
二抗:HRP標記的山羊抗兔IgG,稀釋比1:10,000。
顯色方式?:ECL化學發(fā)光法,預期條帶位于?~13.4 kDa?處。
內參建議?:由于CST3分子量較小,可選用GAPDH(~37 kDa)或β-actin(~42 kDa)作為內參,避免條帶重疊。
產品概述:
PROSC基因編碼的蛋白在人體內主要作為維生素K依賴性凝血因子IX和X的分子伴侶,參與調控這些凝血因子的正確折疊、加工及分泌過程。研究表明,PROSC基因的突變可能導致凝血功能障礙相關疾病。重組人PROSC蛋白主要用于血液凝固機制的基礎研究、分子伴侶功能分析以及相關遺傳性疾病的致病機理探索。值得注意的是,該重組蛋白在生產過程中不含動物源成分,但可能含有甘油和Tris HCl等穩(wěn)定劑,且相關資料顯示其在某些體外實驗中可能不表現(xiàn)出顯著的生物活性。
產品名稱 | Recombinant Human PROSC | 貨號 | A-01K100047 |
表達區(qū)間 | 1-275 | 分子量 | 30.1 kDa |
規(guī)格 | 50μg、200ug、1mg | 種屬 | Human |
商品介紹:
產品名稱:Recombinant Human PROSC
種屬:Human
宿主:E.Coli
表達區(qū)間:1-275
分子量:30.1 kDa
標簽:N-terminal His Tag
性狀:Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
純度:Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
應用:Western Blot, ELISA
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
別稱:FLJ11861, Proline synthase co-transcribed bacterial homolog protein, Proline synthetase co transcribed bacterial homolog, Proline synthetase co transcribed homolog (bacterial), PROSC, PROSC_HUMAN
使用前準備:
離心處理
凍干粉在運輸過程中可能附著于管壁或管蓋,開蓋前應先進行離心,確保粉末沉降至管底。
建議條件:3000–3500 rpm 離心 5 分鐘
若無高速離心機,可適當延長低速離心時間
平衡溫度
將凍干粉緩慢恢復至室溫(避免加熱加速溶解),防止因溫差導致管內冷凝水影響蛋白穩(wěn)定性
溶解(Reconstitution)
溶解液選擇
推薦使用無菌蒸餾水或 PBS(pH 7.4)進行復溶
若用于細胞實驗,可選用含 0.1% BSA 的緩沖液以增強穩(wěn)定性
配制濃度
將凍干粉溶解至終濃度 ?0.1–1.0 mg/mL,此范圍適用于大多數(shù)實驗場景
濃度過高可能導致蛋白聚集,過低則易失活
混勻方式
使用移液槍頭輕輕吹打數(shù)次,或上下輕柔顛倒混勻
嚴禁使用渦旋振蕩器,以免破壞蛋白空間結構,導致活性喪失
儲存條件:
凍干粉:儲存于-20°C至-80°C,避免反復凍融。
復溶后:儲存于2°C至8°C,有效期約1個月;長期存儲建議分裝后置于-20°C至-80°C。
復溶方法:
離心處理:使用前離心收集凍干粉于管底。
復溶緩沖液:加入無菌PBS(含0.1% BSA)或去離子水,輕輕吹打混勻,避免渦旋震蕩。
濃度建議:復溶后蛋白濃度保持在0.1-1.0 mg/mL,分裝保存以減少凍融損傷。
公司正在出售的產品:
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冰凍切片膠原纖維(MASSON)染色試劑盒 | 載玻片細胞NF KAPPA B P65蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 |
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體外非細胞系統(tǒng)細胞色素P450亞酶CYP2B2(PROD)活性 | 磷酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體 |
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Recombinant Human IL-22 | Recombinant Human RGS16 |
應用范圍:
免疫研究:體外評估抗病毒或抗菌免疫應答,分析炎癥反應機制。
細胞培養(yǎng):添加至細胞培養(yǎng)基中,研究其對巨噬細胞活化的影響。
功能實驗:用于中和實驗或信號通路研究(如JAK-STAT通路)。
關鍵字: PROSC;Human;E.Coli;
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