Recombinant Human Proteasome 19S S5A
該蛋白通常對應于人源PSMD4（Proteasome 26S Subunit, Non-ATPase 4）基因的特定區(qū)域（如196-306氨基酸），帶有His等標簽，分子量約為12-15 kDa（具體大小取決于截斷體設計），純度經SDS-PAGE分析高于95%。S5A（又稱Rpn10）是19S調節(jié)顆粒的核心亞基，作為關鍵的泛素受體，通過其C端的泛素相互作用基序（UIM）特異性識別并結合K48連接的多泛素化底物，介導異?；蚨虊鄣鞍走M入20S核心顆粒進行降解。
商品介紹：
A-01K101137-50μg | Recombinant Human Proteasome 19S S5A |
A-01K101137-200ug | Recombinant Human Proteasome 19S S5A |
A-01K101137-1mg | Recombinant Human Proteasome 19S S5A |
別稱：26S protease subunit S5a, 26S proteasome non ATPase regulatory subunit 4, 26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 4, 26S proteasome regulatory subunit rpn10, 26S proteasome regulatory subunit S5A, AF, AF 1, AF1, Angiocidin, Antisecretory factor 1, ASF, DS5a, MCB 1, MCB1, Multiubiquitin chain binding protein, Multiubiquitin chain-binding protein, OTTHUMP00000059963, Prosome macropain
標簽：N-terminal His Tag
種屬：Human
宿主：E.Coli
表達區(qū)間：1-377
分子量：41.4 kDa
應用：Western Blot, ELISA
性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
純度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
檢測原理詳解：
包被抗體結合
實驗開始前，微孔板已預先包被抗人白脂素單克隆抗體。當加入待測樣本后，
樣本中的人白脂素（Asprosin）會與固相載體上的捕獲抗體特異性結合。
形成“夾心復合物”
洗滌去除未結合物質后，加入生物素標記的檢測抗體，該抗體與白脂素分子的另一表位結合，
形成“固相抗體—抗原—檢測抗體”三明治結構。
酶促顯色反應
隨后加入?辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，與生物素檢測抗體結合。
最后加入TMB顯色底物，在HRP催化下產生藍色產物，反應終止后變?yōu)辄S色。
濃度定量分析
黃色深淺與樣本中白脂素含量成正比，通過酶標儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），
并根據(jù)標準曲線計算出樣本中白脂素的濃度。
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實驗步驟：
1. 基因克隆與表達載體構建
從人類FBN1基因C端序列中擴增Asprosin編碼片段（約140aa）。
將目的片段插入原核表達載體，確保帶有?N端或C端His標簽，便于后續(xù)純化。
轉化至?感受態(tài)細胞，篩選陽性克隆并測序驗證。
2. 重組蛋白誘導表達
取陽性菌落接種于LB培養(yǎng)基（含氨芐青霉素），37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
次日按1:100比例轉接至新鮮LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至OD600達0.6–0.8。
加入IPTG至終濃度0.1–1.0 mM，16–25℃誘導表達6–12小時（低溫誘導有助于可溶性達）。
4℃、8000×g離心10分鐘收集菌體，棄上清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3. 菌體裂解與蛋白提取
將菌體沉淀重懸于裂解緩沖液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制劑），超聲破碎
（冰浴條件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g離心20分鐘，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵體蛋白）。
若為包涵體蛋白，需用?洗滌緩沖液（含2M尿素的PBS）洗滌2–3次，去除雜蛋白。
4. 親和層析純化（Ni-NTA法）
將含His標簽的蛋白溶液（或溶解后的包涵體蛋白，使用含6–8M尿素的緩沖液溶解）上樣至?Ni-NTA親和層析柱。
用?洗滌緩沖液（含20–40mM咪唑）洗去非特異性結合蛋白。
用?洗脫緩沖液（含250–500mM咪唑）梯度洗脫目標蛋白，收集洗脫峰。
透析去除尿素與咪唑（使用PBS或生理緩沖液，4℃過夜，更換3次）。
5. 蛋白復性（針對包涵體蛋白）
若蛋白以包涵體形式表達，需在純化后進行?梯度復性：
將變性蛋白緩慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的復性緩沖液中，4℃攪拌過夜?；虿捎?透析法?逐步去除變性劑。復性后再次離心取上清，檢測蛋白活性。
關鍵字： Proteasome 19S S5A;Human;E.Coli;
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