Recombinant Human GSTK1說明書
Recombinant Human GSTK1（重組人谷胱甘肽S-轉移酶kappa 1）是一種通過基因重組技術表達的、主要定位于過氧化物酶體和線粒體的解毒酶，參與催化谷胱甘肽與疏水性物質的結合以促進其排出，在抗氧化應激、代謝調控及腫瘤微環(huán)境適應中發(fā)揮重要作用。
商品介紹：
A-01K102768-50μg | Recombinant Human GSTK1說明書 |
A-01K102768-200ug | Recombinant Human GSTK1說明書 |
A-01K102768-1mg | Recombinant Human GSTK1說明書 |
別稱：EC 2.5.1.18, Glutathione S Transferase kappa 1, Glutathione S transferase subunit 13, Glutathione S-transferase k1, Glutathione S-transferase kappa 1, Glutathione S-transferase subunit 13, Glutathione S-transferase subunit 13 homolog, GST, GST 13 13, GST 13-13, GST class kappa, GST class-kappa, GST13, GST13-13, Gstk1, GSTK1 1, GSTK1-1, GSTK1_HUMAN, hGSTK1
標簽：N-terminal His-IF2DI Tag
種屬：Human
宿主：E.Coli
表達區(qū)間：1-226
分子量：46.1 KDa
Greater than 90% by SDS-PAGE gel analyses
應用：Western Blot, ELISA
性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose and 0.06% proclin, pH7.4
純度：Greater than 90% by SDS-PAGE gel analyses
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
檢測原理詳解：
包被抗體結合
實驗開始前，微孔板已預先包被抗人白脂素單克隆抗體。當加入待測樣本后，
樣本中的人白脂素（Asprosin）會與固相載體上的捕獲抗體特異性結合。
形成“夾心復合物”
洗滌去除未結合物質后，加入生物素標記的檢測抗體，該抗體與白脂素分子的另一表位結合，
形成“固相抗體—抗原—檢測抗體”三明治結構。
酶促顯色反應
隨后加入?辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，與生物素檢測抗體結合。
最后加入TMB顯色底物，在HRP催化下產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，反應終止后變?yōu)辄S色。
濃度定量分析
黃色深淺與樣本中白脂素含量成正比，通過酶標儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），
并根據(jù)標準曲線計算出樣本中白脂素的濃度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
鈣依賴膜結合蛋白Copine蛋白4抗體 | PE標記人CD95單克隆抗體 |
腫瘤轉移抑制蛋白1抗體 | 細菌茁糖酵解溴百里酚藍（BTB）瓊脂平板 |
微纖絲相關糖蛋白抗體 | 透射電鏡（TEM）制片處理清洗液 |
FAM114A2蛋白抗體 | 石蠟切片組織P21蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 |
細胞總乳酸比色法定量檢測試劑盒 | 細胞CASPASE-9蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 |
組織糖原磷酸化酶激酶（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE KINASE）活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 | 磷酸二酯酶1（Phosphodiesterase 1） |
食物D-半乳糖含量光譜法定量檢測試劑盒 | 鳥嘌呤核苷酸交換因子相關蛋白抗體 |
電轉感受態(tài)細菌制備試劑盒 | 電壓門控鉀通道亞基KV9.3抗體 |
細胞PKCδ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） | 有絲分裂抑制缺陷蛋白1抗體 |
純化線粒體膜通道孔（MPTP）紅色熒光（TMRM）檢測試劑盒 | ATP依賴解旋酶SMARCA2抗體 |
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AF555標記的信號轉導和轉錄激活因子5抗體 | 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3抗體 |
Recombinant Human TNF Receptor II | Recombinant Human MICA |
實驗步驟：
1. 基因克隆與表達載體構建
從人類FBN1基因C端序列中擴增Asprosin編碼片段（約140aa）。
將目的片段插入原核表達載體，確保帶有?N端或C端His標簽，便于后續(xù)純化。
轉化至?感受態(tài)細胞，篩選陽性克隆并測序驗證。
2. 重組蛋白誘導表達
取陽性菌落接種于LB培養(yǎng)基（含氨芐青霉素），37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
次日按1:100比例轉接至新鮮LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至OD600達0.6–0.8。
加入IPTG至終濃度0.1–1.0 mM，16–25℃誘導表達6–12小時（低溫誘導有助于可溶性達）。
4℃、8000×g離心10分鐘收集菌體，棄上清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3. 菌體裂解與蛋白提取
將菌體沉淀重懸于裂解緩沖液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制劑），超聲破碎
（冰浴條件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g離心20分鐘，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵體蛋白）。
若為包涵體蛋白，需用?洗滌緩沖液（含2M尿素的PBS）洗滌2–3次，去除雜蛋白。
4. 親和層析純化（Ni-NTA法）
將含His標簽的蛋白溶液（或溶解后的包涵體蛋白，使用含6–8M尿素的緩沖液溶解）上樣至?Ni-NTA親和層析柱。
用?洗滌緩沖液（含20–40mM咪唑）洗去非特異性結合蛋白。
用?洗脫緩沖液（含250–500mM咪唑）梯度洗脫目標蛋白，收集洗脫峰。
透析去除尿素與咪唑（使用PBS或生理緩沖液，4℃過夜，更換3次）。
5. 蛋白復性（針對包涵體蛋白）
若蛋白以包涵體形式表達，需在純化后進行?梯度復性：
將變性蛋白緩慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的復性緩沖液中，4℃攪拌過夜?；虿捎?透析法?逐步去除變性劑。復性后再次離心取上清，檢測蛋白活性。
關鍵字： GSTK1;Human;E.Coli;
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