重組蛋白生產(chǎn)流程
通常包括以下幾個(gè)核心步驟：
基因克隆：首先，科學(xué)家需要獲取編碼目標(biāo)蛋白的特定基因序列（目的基因）。
構(gòu)建載體：將目的基因插入到一個(gè)被稱為“載體”的DNA分子中，這個(gè)載體就像是一個(gè)運(yùn)輸工具，
能將目的基因送入宿主細(xì)胞并指導(dǎo)其表達(dá)。
轉(zhuǎn)入宿主：將構(gòu)建好的重組載體導(dǎo)入選定的宿主細(xì)胞中，這個(gè)過(guò)程稱為“轉(zhuǎn)化”或“轉(zhuǎn)染”。
表達(dá)與培養(yǎng)：宿主細(xì)胞在適宜的條件下進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，其自身的遺傳系統(tǒng)會(huì)讀取重組載體上的基因信息，開(kāi)始大量生產(chǎn)目標(biāo)蛋白。
純化：通過(guò)一系列復(fù)雜的生物化學(xué)方法（如層析技術(shù)），將目標(biāo)重組蛋白從宿主細(xì)胞的眾多混合物中分離出來(lái)，以獲得高純度的產(chǎn)品。
產(chǎn)品概述：
Recombinant Human HK3 是一種通過(guò)大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)制備的、帶有C端His標(biāo)簽的人源重組己糖激酶3（Hexokinase-3）。作為己糖激酶家族成員，它能催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸，從而將葡萄糖鎖定在細(xì)胞內(nèi)并導(dǎo)向糖酵解途徑，其酶活性可被產(chǎn)物葡萄糖-6-磷酸別構(gòu)抑制。該重組蛋白純度超過(guò)95%，以凍干粉形式提供，主要用于糖代謝及腫瘤代謝重編程等領(lǐng)域的科學(xué)研究。
產(chǎn)品名稱 | Recombinant Human HK3說(shuō)明書(shū) | 貨號(hào) | A-01K99609 |
表達(dá)區(qū)間 | 1-61 | 分子量 | 27.1 KDa |
規(guī)格 | 50μg、200ug、1mg | 種屬 | Human |
商品介紹：
產(chǎn)品名稱：Recombinant Human HK3說(shuō)明書(shū)
種屬：Human
宿主：E.Coli
表達(dá)區(qū)間：1-61
分子量：27.1 KDa
Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses
標(biāo)簽：N-terminal His-IF2DI Tag
性狀：Lyophilized from a 0.2μm filtered solution in PBS with 5% trehalose, pH7.4
純度：Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses
應(yīng)用：Western Blot, ELISA
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲(chǔ):-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
別稱：Hexokinase 3, hexokinase 3 (white cell), Hexokinase type III, HK III, HK3, HKIII, HXK3
使用前準(zhǔn)備：
離心處理
凍干粉在運(yùn)輸過(guò)程中可能附著于管壁或管蓋，開(kāi)蓋前應(yīng)先進(jìn)行離心，確保粉末沉降至管底。
建議條件：3000–3500 rpm 離心 5 分鐘
若無(wú)高速離心機(jī)，可適當(dāng)延長(zhǎng)低速離心時(shí)間
平衡溫度
將凍干粉緩慢恢復(fù)至室溫（避免加熱加速溶解），防止因溫差導(dǎo)致管內(nèi)冷凝水影響蛋白穩(wěn)定性
溶解（Reconstitution）
溶解液選擇
推薦使用無(wú)菌蒸餾水或 PBS（pH 7.4）進(jìn)行復(fù)溶
若用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，可選用含 0.1% BSA 的緩沖液以增強(qiáng)穩(wěn)定性
配制濃度
將凍干粉溶解至終濃度 ?0.1–1.0 mg/mL，此范圍適用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景
濃度過(guò)高可能導(dǎo)致蛋白聚集，過(guò)低則易失活
混勻方式
使用移液槍頭輕輕吹打數(shù)次，或上下輕柔顛倒混勻
嚴(yán)禁使用渦旋振蕩器，以免破壞蛋白空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致活性喪失
儲(chǔ)存條件：
凍干粉：儲(chǔ)存于-20°C至-80°C，避免反復(fù)凍融。
復(fù)溶后：儲(chǔ)存于2°C至8°C，有效期約1個(gè)月；長(zhǎng)期存儲(chǔ)建議分裝后置于-20°C至-80°C。
復(fù)溶方法：
離心處理：使用前離心收集凍干粉于管底。
復(fù)溶緩沖液：加入無(wú)菌PBS（含0.1% BSA）或去離子水，輕輕吹打混勻，避免渦旋震蕩。
濃度建議：復(fù)溶后蛋白濃度保持在0.1-1.0 mg/mL，分裝保存以減少凍融損傷。
公司正在出售的產(chǎn)品：
過(guò)氧化物酶體膜蛋白2抗體 | RhoA抗體 |
中心體蛋白89抗體 | 血液結(jié)合（酯化）酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
微管蛋白聚合促進(jìn)蛋白24 | 人血液免疫球蛋白E（IgE）免疫比濁法定量檢測(cè)試劑盒 |
FITC標(biāo)記人CD95單克隆抗體 | 細(xì)胞樣品蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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動(dòng)物腦組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 | A型流感病毒H3N2-M2蛋白抗體 |
微型RNA（miRNA）定量擴(kuò)增分析試劑盒 | Recombinant Human HK3說(shuō)明書(shū)?磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體 |
人IgM單克隆抗體 | 膠原蛋白6α2抗體 |
Recombinant Human TNFAIP3 | Recombinant Human SMN |
應(yīng)用范圍：
免疫研究：體外評(píng)估抗病毒或抗菌免疫應(yīng)答，分析炎癥反應(yīng)機(jī)制。
細(xì)胞培養(yǎng)：添加至細(xì)胞培養(yǎng)基中，研究其對(duì)巨噬細(xì)胞活化的影響。
功能實(shí)驗(yàn)：用于中和實(shí)驗(yàn)或信號(hào)通路研究（如JAK-STAT通路）。
關(guān)鍵字： HK3;Human;E.Coli;
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、 華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。
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