人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞

質(zhì)量檢測(cè)： 博爾森生物實(shí)驗(yàn)室分離的人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞經(jīng)波形蛋白(Vimentin)  免疫熒光染色為陽性，純 度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、  HBV、  HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用博爾森生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。     
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài) 
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片  
三、使用方法   
在博爾森生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。  
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。  
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。  
2. 貼壁細(xì)胞消化 
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；  
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；  
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；  
4)待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。  
3. 懸浮細(xì)胞處理 
1)收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；  
2)1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；
3)加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37°C、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大，無法機(jī)械吹散時(shí)，向步驟2)中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37°C溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰酶抑制劑(或血清)終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞；1200rpm離心5min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；
5)加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37°C、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
6)待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。     
4. 細(xì)胞收貨脫落 
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；  
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；  
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(補(bǔ)加1%FBS，促進(jìn)貼壁)重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；  
4)待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。  
5. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。         
四、注意事項(xiàng) 
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。  
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。  
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。  
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和博爾森生物技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。   
5. 該細(xì)胞只可用于科研。   
1)本產(chǎn)品未通過直接用于活體動(dòng)物和人的審核    
2)本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核   

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考