采用雙抗體夾心法：將抗人n-乙酰胞壁酰-l-丙氨酸酰氨酶單克隆抗體包被于酶標(biāo)板微孔，樣本中的目標(biāo)抗原與包被抗體結(jié)合后，加入HRP標(biāo)記的多克隆抗體。經(jīng)過(guò)孵育、洗滌后，加入底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣本中目標(biāo)分子的濃度，反映細(xì)菌細(xì)胞壁代謝相關(guān)酶的活性水平。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人n-乙酰胞壁酰-l-丙氨酸酰氨酶(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase)elisa試劑盒 | 靈敏度 | 0.078125ng/ml |
英文名稱(chēng) | human N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase elisa kit | 貨號(hào) | PH22680 |
檢測(cè)范圍 | 0.15625ng/ml-10ng/ml | 品牌 | 派瑞曼 |
夾心法數(shù)據(jù)：
以下數(shù)據(jù)和曲線(xiàn)僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
| 校準(zhǔn)品濃度(ng/mL) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.691 | 1.552 | 0.828 | 0.488 | 0.355 | 0.173 | 0.097 | 0.030 |
| 校正OD值 | 2.660 | 1.521 | 0.798 | 0.458 | 0.325 | 0.142 | 0.067 | 0.000 |
夾心法標(biāo)曲：
核心參數(shù)：
檢測(cè)原理：雙抗體夾心法 ELISA，抗原抗體特異性結(jié)合，酶底物顯色，酶標(biāo)儀定量
種屬反應(yīng)性：僅特異性識(shí)別人源該酶，無(wú)其他物種交叉反應(yīng)
檢測(cè)時(shí)間：2.5~3h
保存條件：2-8℃避光密封冷藏，嚴(yán)禁冷凍
特異性：不與同類(lèi)水解酶發(fā)生交叉結(jié)合
板內(nèi)變異系數(shù)：＜8%
操作步驟:
?試劑準(zhǔn)備?：所有試劑恢復(fù)至室溫（18–25℃），洗滌液如有結(jié)晶需加熱溶解；
?標(biāo)準(zhǔn)品配制?：將凍干標(biāo)準(zhǔn)品用1mL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解，得2000 pg/mL原液，再倍比稀釋成7個(gè)濃度梯度，另設(shè)空白孔（僅稀釋液）；
?加樣?：每孔加入50μL樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育30–60分鐘；
?洗板?：棄去孔內(nèi)液體，用1×洗滌液洗板5次，拍干；
?加酶標(biāo)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育1小時(shí)；
?洗板?：同上；
?顯色?：每孔加入50μL底物A + 50μL底物B，37℃避光孵育10–30分鐘；
?終止?：每孔加入50μL終止液，顏色由藍(lán)變黃；
?讀數(shù)?：在450 nm波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣本濃度。
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關(guān)鍵字： 人n-乙酰胞壁酰-l-丙氨酸酰氨酶;N-acetylmuramoyl-L-a;elisa試劑盒;
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