Recombinant Human TEAD4規(guī)格
該蛋白屬于 TEAD（TEA/ATTS 結(jié)構(gòu)域）轉(zhuǎn)錄因子家族，其核心結(jié)構(gòu)包含一個 N 端的TEA/ATTS DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個 C 端的YAP/TAZ 結(jié)合結(jié)構(gòu)域。TEAD4 的核心生物學(xué)功能是作為 Hippo 信號通路的關(guān)鍵下游轉(zhuǎn)錄因子，通常與輔激活因子 YAP（Yes-associated protein）或 TAZ（Transcriptional co-activator with PDZ-binding motif）結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，進而調(diào)控一系列與細(xì)胞增殖、
商品介紹：
A-01K101595-50μg | Recombinant Human TEAD4規(guī)格 |
A-01K101595-200ug | Recombinant Human TEAD4規(guī)格 |
A-01K101595-1mg | Recombinant Human TEAD4規(guī)格 |
別稱：EFTR 2, EFTR2, hRTEF 1B, hRTEF1B, MGC9014, OTTHUMP00000238119, OTTHUMP00000238122, OTTHUMP00000238124, Related to TEF 1, Related to TEF1, Related transcription enhancer factor 1B, RTEF1, TCF13L1, TEA domain family member 4, TEAD 4, TEAD-4, TEAD4, TEAD4_HUMAN, TEF 3, TEF3, TEFR 1, TEFR1, Transcription factor 13 (SV40 transcriptional enhancer factor) like 1, Transcription factor 13 like 1
標(biāo)簽：N-terminal His Tag
種屬：Human
宿主：E.Coli
表達(dá)區(qū)間：74-434
分子量：39.6 kDa
應(yīng)用：Western Blot, ELISA
性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
純度：Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
檢測原理詳解：
包被抗體結(jié)合
實驗開始前，微孔板已預(yù)先包被抗人白脂素單克隆抗體。當(dāng)加入待測樣本后，
樣本中的人白脂素（Asprosin）會與固相載體上的捕獲抗體特異性結(jié)合。
形成“夾心復(fù)合物”
洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入生物素標(biāo)記的檢測抗體，該抗體與白脂素分子的另一表位結(jié)合，
形成“固相抗體—抗原—檢測抗體”三明治結(jié)構(gòu)。
酶促顯色反應(yīng)
隨后加入?辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素檢測抗體結(jié)合。
最后加入TMB顯色底物，在HRP催化下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，反應(yīng)終止后變?yōu)辄S色。
濃度定量分析
黃色深淺與樣本中白脂素含量成正比，通過酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），
并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中白脂素的濃度。
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實驗步驟：
1. 基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建
從人類FBN1基因C端序列中擴增Asprosin編碼片段（約140aa）。
將目的片段插入原核表達(dá)載體，確保帶有?N端或C端His標(biāo)簽，便于后續(xù)純化。
轉(zhuǎn)化至?感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽性克隆并測序驗證。
2. 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
取陽性菌落接種于LB培養(yǎng)基（含氨芐青霉素），37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
次日按1:100比例轉(zhuǎn)接至新鮮LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至OD600達(dá)0.6–0.8。
加入IPTG至終濃度0.1–1.0 mM，16–25℃誘導(dǎo)表達(dá)6–12小時（低溫誘導(dǎo)有助于可溶性達(dá)）。
4℃、8000×g離心10分鐘收集菌體，棄上清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3. 菌體裂解與蛋白提取
將菌體沉淀重懸于裂解緩沖液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制劑），超聲破碎
（冰浴條件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g離心20分鐘，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵體蛋白）。
若為包涵體蛋白，需用?洗滌緩沖液（含2M尿素的PBS）洗滌2–3次，去除雜蛋白。
4. 親和層析純化（Ni-NTA法）
將含His標(biāo)簽的蛋白溶液（或溶解后的包涵體蛋白，使用含6–8M尿素的緩沖液溶解）上樣至?Ni-NTA親和層析柱。
用?洗滌緩沖液（含20–40mM咪唑）洗去非特異性結(jié)合蛋白。
用?洗脫緩沖液（含250–500mM咪唑）梯度洗脫目標(biāo)蛋白，收集洗脫峰。
透析去除尿素與咪唑（使用PBS或生理緩沖液，4℃過夜，更換3次）。
5. 蛋白復(fù)性（針對包涵體蛋白）
若蛋白以包涵體形式表達(dá)，需在純化后進行?梯度復(fù)性：
將變性蛋白緩慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的復(fù)性緩沖液中，4℃攪拌過夜?；虿捎?透析法?逐步去除變性劑。復(fù)性后再次離心取上清，檢測蛋白活性。
關(guān)鍵字： TEAD4;Human;E.Coli;
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