Recombinant Human WDR77說明書
商品介紹：
A-01K102275-50μg | Recombinant Human WDR77說明書 |
A-01K102275-200ug | Recombinant Human WDR77說明書 |
A-01K102275-1mg | Recombinant Human WDR77說明書 |
別稱：2610312E17Rik, Androgen receptor cofactor p44, C79984, HKMT1069, MEP 50, MEP-50, MEP50, MEP50_HUMAN, Methylosome protein 50, MGC2722, Nbla10071, p44, p44/Mep50, RGD1310479, RP11 552M11.3, WD repeat containing protein 77, WD repeat domain 77, WD repeat-containing protein 77, WDR77
標(biāo)簽：N-terminal His-IF2DI Tag
種屬：Human
宿主：E.Coli
表達(dá)區(qū)間：1-312
分子量：54.2 kDa
Greater than 90% as determined by SDS-PAGE
應(yīng)用：Western Blot, ELISA
性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
純度：Greater than 90% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water
存儲:-20°C for 12 months as lyophilized,2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
商品概述：
WDR77蛋白是蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5（PRMT5）的核心共激活因子，二者形成穩(wěn)定的復(fù)合物。其核心功能是作為支架蛋白，通過其WD40重復(fù)結(jié)構(gòu)域促進(jìn)PRMT5對多種靶蛋白（如組蛋白H2A、H4和SM蛋白）的對稱性二甲基化修飾，從而在表觀遺傳調(diào)控、RNA剪接和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。研究表明，WDR77在多種癌癥（如前列腺癌、肺癌）中高表達(dá)，且其與PRMT5的相互作用對于癌細(xì)胞的增殖和存活至關(guān)重要。此外，該復(fù)合物也被發(fā)現(xiàn)參與調(diào)控T細(xì)胞的免疫功能，影響PD-1等免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)。
重組蛋白的制備流程：
重組蛋白的制備流程主要包括以下幾個關(guān)鍵步驟：
1.基因獲?。簭纳矬w中提取目的基因，可通過PCR技術(shù)擴(kuò)增特定DNA片段，也可以人工合成基因序列，確保所獲取的基因能編碼目標(biāo)重組蛋白。
2.載體構(gòu)建：將獲取的目的基因與合適的載體連接，常見載體有質(zhì)粒、噬菌體等。載體需具備復(fù)制原點(diǎn)、篩選標(biāo)記等元件，使目的基因能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定復(fù)制和表達(dá)。
3.宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化：把構(gòu)建好的重組載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，如大腸桿菌、酵母細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞等。轉(zhuǎn)化方法有化學(xué)轉(zhuǎn)化法、電穿孔法等。
4.篩選與鑒定：運(yùn)用抗生素篩選、PCR鑒定、測序等方法，挑選出含有重組載體的陽性克隆細(xì)胞。
5.蛋白表達(dá)：優(yōu)化培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)陽性克隆細(xì)胞表達(dá)重組蛋白。根據(jù)宿主細(xì)胞類型和蛋白特性，調(diào)整溫度、誘導(dǎo)劑濃度等參數(shù)。
6.蛋白純化：采用親和層析、離子交換層析、凝膠過濾等方法，從細(xì)胞裂解液或培養(yǎng)液中分離純化重組蛋白。
7.質(zhì)量檢測：對純化后的重組蛋白進(jìn)行純度、活性、分子量等檢測，確保其符合質(zhì)量要求。
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收到產(chǎn)品后的處理：
離心收集：重組蛋白通常以凍干粉形式提供。在運(yùn)輸過程中，粉末可能會粘附在管壁或管蓋上。因此，在開蓋前，務(wù)必先進(jìn)行短暫離心（例如 10,000-12,000 rpm，30秒），將凍干粉收集于管底。
復(fù)溶操作
選擇合適的溶劑：
仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書，嚴(yán)格按照推薦的溶劑和濃度進(jìn)行復(fù)溶。
通常使用無菌的 PBS 緩沖液或低鹽緩沖液（如 10 mM Tris, pH 8.0）。
切勿使用純水，因為缺乏緩沖能力和合適的離子強(qiáng)度可能導(dǎo)致蛋白沉淀或失活。
輕柔混勻：
向凍干粉中加入推薦體積的溶劑，用移液器槍頭輕輕吹打或緩慢上下顛倒混勻。
絕對禁止渦旋震蕩，因為劇烈的剪切力會破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致其變性失活。
如果蛋白難以溶解，可將其置于 4℃ 靜置 2 小時以上或在水平搖床上低速搖晃。
達(dá)到推薦濃度：
初次復(fù)溶時，建議將蛋白濃度配制在說明書推薦的范圍內(nèi)（通常不低于 100 μg/mL），這有助于維持蛋白的穩(wěn)定性。
關(guān)鍵字： WDR77;Human;E.Coli;
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