A組β溶血性鏈球菌探針法qPCR試劑盒(不含內(nèi)參)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
化膿性鏈球菌（Streptococcus pyogenes）又叫A組β溶血性鏈球菌（Group A Streptococcus，GAS），它是常見的人類感染致病菌，屬于革蘭氏陽性菌。主要感染性疾病有咽喉炎、猩紅熱、肺炎、皮膚膿腫等，反復(fù)感染引發(fā)繼發(fā)風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎等自身免疫性疾病。GAS壞死性感染，主要引起敗血癥、中毒性休克綜合癥及壞死性筋膜炎，輕者導(dǎo)致肢體壞死而截肢，治療不及時(shí)可造成死亡，死亡率為20-50%。因此快速靈敏診斷A組β溶血性鏈球菌具有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)A組β溶血性鏈球菌的試劑盒，它有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)A組β溶血性鏈球菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
成分 | 規(guī)格 | 包裝 |
2×Probe qPCR MasterMix | 0.5mL | 0.5mL本色管 |
熒光PCR專用模板稀釋液 | 1mL | 1.5mL綠蓋管 |
超純水 | 1mL | 1.5mL藍(lán)蓋管 |
A組β溶血性鏈球菌qPCR引物-探針干粉 | 50次 | 1.5mL棕色管 |
A組β溶血性鏈球菌qPCR陽性對(duì)照(1E7拷貝/μL) | 50μL | 0.5mL黃蓋管 |
使用手冊(cè) | 1份 | 無 |
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品
（以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽性或陰性，則陰性對(duì)照必須無Ct或Ct大于或等于35。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于35，否則實(shí)驗(yàn)無效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測(cè)樣品，如果無Ct或Ct大于或等于35，則為陰性。如果Ct小于35則為陽性。
自備試劑
樣品DNA。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年。
關(guān)鍵字： qRT-PCR試劑盒 ; 探針法試劑盒 ; A組β溶血性鏈球菌探針法 ;
上海酶聯(lián)生物科技有限公司，成立之初，獲得國內(nèi)外酶聯(lián)免疫同行的大力支持，公司為了感恩于同行無私的幫助，特取意酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（ELISA試劑盒）的“酶聯(lián)”兩字，時(shí)刻銘記回報(bào)社會(huì)，公司已制定十年內(nèi)，將公司打造成國內(nèi)酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA試劑盒）行業(yè)超級(jí)航母，并且，這么多年，我們一直是為了這個(gè)愿景，堅(jiān)定不移的努力奮斗著。