Recombinant Human PSMB5圖片

商品介紹：

別稱：DKFZp459C139, EC 3.4.25.1, LMPX, Macropain epsilon chain, MB1, MGC104214, MGC118075, MGC134464, Multicatalytic endopeptidase complex epsilon chain, Proteasome (prosome, macropain) subunit, beta type, 5, Proteasome beta 5 subunit, Proteasome catalytic subunit 3, Proteasome chain 6, Proteasome epsilon chain, Proteasome subunit beta type-5, Proteasome subunit MB1, Proteasome subunit X, Proteasome subunit

標(biāo)簽：N-terminal His-IF2DI Tag

種屬：Human

宿主：E.Coli

表達(dá)區(qū)間：60-263

分子量：43.1 kDa

                 Greater than 85% by SDS-PAGE gel analyses

應(yīng)用：Western Blot, ELISA

性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose and 0.06% proclin, pH7.4

純度：Greater than 85% by SDS-PAGE gel analyses

溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

商品概述：

該蛋白通常為帶有His等標(biāo)簽的融合蛋白，對應(yīng)于人源PSMB5（Proteasome Subunit Beta Type-5）的全長或催化核心區(qū)域（如56-256氨基酸），分子量約為27-30 kDa（具體大小取決于標(biāo)簽和截?cái)嘣O(shè)計(jì)），純度經(jīng)SDS-PAGE分析可達(dá)85%以上。PSMB5是20S核心顆粒（20S core particle, CP）的關(guān)鍵催化亞基，屬于N端蘇氨酸（Thr1）依賴的蛋白酶，主要負(fù)責(zé)蛋白酶體的胰凝乳蛋白酶樣（Chymotrypsin-like, CT-L）活性，特異性切割疏水性氨基

重組蛋白的制備流程：

重組蛋白的制備流程主要包括以下幾個關(guān)鍵步驟：

1.基因獲?。簭纳矬w中提取目的基因，可通過PCR技術(shù)擴(kuò)增特定DNA片段，也可以人工合成基因序列，確保所獲取的基因能編碼目標(biāo)重組蛋白。

2.載體構(gòu)建：將獲取的目的基因與合適的載體連接，常見載體有質(zhì)粒、噬菌體等。載體需具備復(fù)制原點(diǎn)、篩選標(biāo)記等元件，使目的基因能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定復(fù)制和表達(dá)。

3.宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化：把構(gòu)建好的重組載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，如大腸桿菌、酵母細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞等。轉(zhuǎn)化方法有化學(xué)轉(zhuǎn)化法、電穿孔法等。

4.篩選與鑒定：運(yùn)用抗生素篩選、PCR鑒定、測序等方法，挑選出含有重組載體的陽性克隆細(xì)胞。

5.蛋白表達(dá)：優(yōu)化培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)陽性克隆細(xì)胞表達(dá)重組蛋白。根據(jù)宿主細(xì)胞類型和蛋白特性，調(diào)整溫度、誘導(dǎo)劑濃度等參數(shù)。

6.蛋白純化：采用親和層析、離子交換層析、凝膠過濾等方法，從細(xì)胞裂解液或培養(yǎng)液中分離純化重組蛋白。

7.質(zhì)量檢測：對純化后的重組蛋白進(jìn)行純度、活性、分子量等檢測，確保其符合質(zhì)量要求。

公司正在出售的產(chǎn)品：

收到產(chǎn)品后的處理：

離心收集：重組蛋白通常以凍干粉形式提供。在運(yùn)輸過程中，粉末可能會粘附在管壁或管蓋上。因此，在開蓋前，務(wù)必先進(jìn)行短暫離心（例如 10,000-12,000 rpm，30秒），將凍干粉收集于管底。

復(fù)溶操作

選擇合適的溶劑：

仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書，嚴(yán)格按照推薦的溶劑和濃度進(jìn)行復(fù)溶。

通常使用無菌的 PBS 緩沖液或低鹽緩沖液（如 10 mM Tris, pH 8.0）。

切勿使用純水，因?yàn)槿狈彌_能力和合適的離子強(qiáng)度可能導(dǎo)致蛋白沉淀或失活。

輕柔混勻：

向凍干粉中加入推薦體積的溶劑，用移液器槍頭輕輕吹打或緩慢上下顛倒混勻。

絕對禁止渦旋震蕩，因?yàn)閯×业募羟辛茐牡鞍踪|(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致其變性失活。

如果蛋白難以溶解，可將其置于 4℃ 靜置 2 小時(shí)以上或在水平搖床上低速搖晃。

達(dá)到推薦濃度：

初次復(fù)溶時(shí)，建議將蛋白濃度配制在說明書推薦的范圍內(nèi)（通常不低于 100 μg/mL），這有助于維持蛋白的穩(wěn)定性。