Recombinant Human Rheb說明書

商品介紹：

別稱：GTP-binding protein Rheb; MGC111559; Ras homolog enriched in brainRHEB2Ras homolog enriched in brain 2; Rheb; Rheb2

標(biāo)簽：N-terminal His Tag

種屬：Human

宿主：E.Coli

表達(dá)區(qū)間：1-184

分子量：22.3 KDa

                 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE

應(yīng)用：Western Blot, ELISA

性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in PBS with 5% trehalose, pH7.4

純度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE

溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存儲(chǔ):-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

商品概述：

該蛋白屬于Ras小GTP酶超家族，是mTORC1（哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1）信號(hào)通路中不可或缺的近端激活因子。Rheb通過在GTP結(jié)合的“活化”態(tài)和GDP結(jié)合的“失活”態(tài)之間循環(huán)，充當(dāng)分子開關(guān)。當(dāng)處于活化狀態(tài)時(shí)，膜定位的Rheb-GTP會(huì)直接結(jié)合并激活mTORC1，進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)、脂質(zhì)合成，抑制自噬，從而全局性地調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝。此外，研究還發(fā)現(xiàn)Rheb存在不依賴mTORC1的功能，例如在線粒體中通過激活丙酮酸脫氫酶（PDH）來調(diào)節(jié)能量代謝。

重組蛋白的制備流程：

重組蛋白的制備流程主要包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：

1.基因獲取：從生物體中提取目的基因，可通過PCR技術(shù)擴(kuò)增特定DNA片段，也可以人工合成基因序列，確保所獲取的基因能編碼目標(biāo)重組蛋白。

2.載體構(gòu)建：將獲取的目的基因與合適的載體連接，常見載體有質(zhì)粒、噬菌體等。載體需具備復(fù)制原點(diǎn)、篩選標(biāo)記等元件，使目的基因能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定復(fù)制和表達(dá)。

3.宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化：把構(gòu)建好的重組載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，如大腸桿菌、酵母細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等。轉(zhuǎn)化方法有化學(xué)轉(zhuǎn)化法、電穿孔法等。

4.篩選與鑒定：運(yùn)用抗生素篩選、PCR鑒定、測(cè)序等方法，挑選出含有重組載體的陽性克隆細(xì)胞。

5.蛋白表達(dá)：優(yōu)化培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)陽性克隆細(xì)胞表達(dá)重組蛋白。根據(jù)宿主細(xì)胞類型和蛋白特性，調(diào)整溫度、誘導(dǎo)劑濃度等參數(shù)。

6.蛋白純化：采用親和層析、離子交換層析、凝膠過濾等方法，從細(xì)胞裂解液或培養(yǎng)液中分離純化重組蛋白。

7.質(zhì)量檢測(cè)：對(duì)純化后的重組蛋白進(jìn)行純度、活性、分子量等檢測(cè)，確保其符合質(zhì)量要求。

公司正在出售的產(chǎn)品：

收到產(chǎn)品后的處理：

離心收集：重組蛋白通常以凍干粉形式提供。在運(yùn)輸過程中，粉末可能會(huì)粘附在管壁或管蓋上。因此，在開蓋前，務(wù)必先進(jìn)行短暫離心（例如 10,000-12,000 rpm，30秒），將凍干粉收集于管底。

復(fù)溶操作

選擇合適的溶劑：

仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書，嚴(yán)格按照推薦的溶劑和濃度進(jìn)行復(fù)溶。

通常使用無菌的 PBS 緩沖液或低鹽緩沖液（如 10 mM Tris, pH 8.0）。

切勿使用純水，因?yàn)槿狈彌_能力和合適的離子強(qiáng)度可能導(dǎo)致蛋白沉淀或失活。

輕柔混勻：

向凍干粉中加入推薦體積的溶劑，用移液器槍頭輕輕吹打或緩慢上下顛倒混勻。

絕對(duì)禁止渦旋震蕩，因?yàn)閯×业募羟辛?huì)破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致其變性失活。

如果蛋白難以溶解，可將其置于 4℃ 靜置 2 小時(shí)以上或在水平搖床上低速搖晃。

達(dá)到推薦濃度：

初次復(fù)溶時(shí)，建議將蛋白濃度配制在說明書推薦的范圍內(nèi)（通常不低于 100 μg/mL），這有助于維持蛋白的穩(wěn)定性。