環(huán)指蛋白186抗體

原理特點(diǎn)

該抗體靶向環(huán)指蛋白186，原理是結(jié)合該泛素化調(diào)控蛋白特異性抗原表位，該蛋白主要參與細(xì)胞免疫調(diào)控、蛋白降解、炎癥信號(hào)通路調(diào)節(jié)。產(chǎn)品特點(diǎn)為特異性專(zhuān)一、檢測(cè)背景低，可有效區(qū)分同源環(huán)指蛋白，靈敏度穩(wěn)定，適用于免疫調(diào)控、炎癥反應(yīng)、蛋白泛素化修飾相關(guān)機(jī)制研究。
英文名稱:RNF186 Rabbit pAb
中文名稱:環(huán)指蛋白186抗體

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文別名:FLJ20225; Ring finger protein 186; RNF 186; RP11 91K11.1; RN186_HUMAN.

交叉反應(yīng):Mouse

抗體來(lái)源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human RNF186

亞型:IgG

性狀:Liquid

純化方法:affinity purified by Protein A

克隆類(lèi)型:Polyclonal

理論分子量：24 kDa

濃度：1mg/ml

儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景

泛素連接酶功能：環(huán)指蛋白186（RNF186）是E3泛素連接酶，參與蛋白泛素化修飾，調(diào)控細(xì)胞凋亡、自噬、免疫應(yīng)答等過(guò)程，維持細(xì)胞功能和免疫穩(wěn)態(tài)。

免疫調(diào)控：RNF186可靶向降解免疫調(diào)節(jié)蛋白，調(diào)控T細(xì)胞活化、細(xì)胞因子分泌等免疫應(yīng)答過(guò)程，其功能異常可導(dǎo)致自身免疫病或感染性疾病；在腫瘤中，RNF186可通過(guò)調(diào)控腫瘤細(xì)胞凋亡、免疫微環(huán)境，影響腫瘤進(jìn)展。

研究意義：RNF186抗體可用于研究泛素化修飾機(jī)制、免疫調(diào)控機(jī)制；開(kāi)發(fā)治療自身免疫病、感染性疾病或腫瘤的藥物，通過(guò)調(diào)控RNF186活性干預(yù)細(xì)胞凋亡、免疫應(yīng)答或腫???
樣本處理與實(shí)驗(yàn)操作

1. Western Blot（免疫印跡）

樣本制備

細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度

組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致

變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣

抗體孵育

轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)

一抗稀釋后4℃孵育過(guò)夜（12-16小時(shí)），或室溫孵育1-2小時(shí)；孵育時(shí)保證膜完全浸沒(méi)在抗體溶液中

TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋?zhuān)┦覝胤跤?-2小時(shí)

再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)采集圖像

2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）

樣本前處理

脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗

抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫

封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘

抗體孵育

一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過(guò)夜；孵育時(shí)置于濕盒中，防止液體揮發(fā)

次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘

PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時(shí)間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片

3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）

樣本制備

細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘

通透處理（根據(jù)抗體類(lèi)型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次

封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合

抗體孵育

一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過(guò)夜，或室溫孵育1-2小時(shí)

PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋?zhuān)?，室溫避光孵?0-60分鐘

再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像

4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）

包被與封閉

用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過(guò)夜

棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時(shí)

抗體孵育

一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時(shí)，或4℃孵育過(guò)夜

PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時(shí)

洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀取OD值

公司正在出售的產(chǎn)品