湖南匯百益潮霉素B(Hygromycin B)是吸水鏈霉菌代謝生成的氨基糖苷類抗生素,CAS號31282-04-9,分子式C??H??N?O??,外觀為微黃褐色無定形粉末,易溶于水、甲醇,難溶于醚類有機溶劑,常溫避光、-20℃密封儲存可長期穩(wěn)定保存。 其獨特優(yōu)勢是同時殺傷原核與真核細胞:結(jié)合70S、80S核糖體,阻斷翻譯延伸階段的tRNA易位,還誘導(dǎo)mRNA堿基錯讀,全面抑制蛋白質(zhì)合成,對細菌、酵母菌、真菌、動植物及哺乳動物細胞均具備強細胞毒性。大腸桿菌hph抗性基因編碼潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶,可將藥物磷酸化失活,以此作為篩選標(biāo)記,廣泛用于分子生物學(xué)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建。 不同體系篩選濃度差異顯著:哺乳動物細胞常規(guī)200–500 μg/mL,植物、細菌20–200 μg/mL,真菌300–1000 μg/mL;新細胞系需先做殺滅曲線確定最優(yōu)劑量,避免篩選失效或細胞大量死亡。實驗中常與G418搭配實現(xiàn)雙基因共轉(zhuǎn)篩選,二者作用靶點無重疊,互不干擾。 使用時需無菌過濾配制工作液,該物質(zhì)具有一定細胞毒性與刺激性,操作需佩戴防護用具,廢液經(jīng)滅活處理后再排放。因廣譜殺傷特性,潮霉素B是質(zhì)粒載體篩選、基因編輯、穩(wěn)定細胞株傳代維持的核心試劑,在細胞工程、植物轉(zhuǎn)基因、微生物改造領(lǐng)域不可或缺。
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