人假尿苷酸合酶1(PUS1)重組蛋白用于 PUS1 RNA 修飾酶活性驗證、tRNA 假尿嘧啶修飾調控、線粒體 RNA 穩(wěn)態(tài)相關體外分子生化實驗。
型號：YS-DB2327
產品名稱：人假尿苷酸合酶1(PUS1)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant Pseudouridylate Synthase 1 (PUS1)
MLASA; tRNA pseudouridine(38-40) synthase; tRNA pseudouridine synthase A, mitochondrial; tRNA-uridine isomerase I
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人)
來源：原核表達
宿主E.coli
內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位：：分泌
預測分子量：51.2kDa
實際分子量：51kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽：Met1~Asp427 with N-terminal His Tag
緩沖液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
性狀：凍干粉
純度：> 90%
等電點：8.7
應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測原理：
Western Blot 驗證：PUS1 特異性抗體結合重組蛋白，條帶大小匹配理論分子量，確認蛋白表達正確。
SDS-PAGE 純度檢測：電泳分離雜蛋白，灰度分析重組蛋白純度。
RNA 異構酶活性檢測：催化 RNA 尿嘧啶異構化為假尿嘧啶，色譜或探針雜交檢測修飾 RNA 產物，定量合酶活性。
RNA 底物結合驗證：凝膠遷移試驗證明 PUS1 可特異性結合靶 RNA 序列，證明蛋白核酸結合結構域折疊正常。
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使用方法：
1. 蛋白復溶
解凍：從低溫冰箱取出蛋白后，立即置于冰上緩慢解凍，避免室溫放置導致蛋白變性。
緩沖液選擇：根據蛋白特性選擇合適的復溶緩沖液，常用基礎緩沖液為10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl維持滲透壓，或添加1-5mM DTT、β-巰基乙醇等還原劑保持蛋白穩(wěn)定性。
復溶操作：根據蛋白濃度，加入適量緩沖液使終濃度達到0.1-1.0mg/mL（部分難溶蛋白可適當調整濃度）；輕輕顛倒離心管或用移液器緩慢吹打混勻，避免劇烈震蕩；置于冰上靜置10-30分鐘，期間可輕柔混勻2-3次，確保蛋白充分溶解。
2. 活性測定（以酶類蛋白為例）
試劑準備：根據酶的催化特性，配制相應的底物溶液、輔助因子溶液、反應緩沖液等；確保所有試劑均為分析純以上級別，且在有效期內。
反應體系優(yōu)化：通過預實驗確定酶的最適反應溫度、pH值、底物濃度、酶濃度等參數；通常反應體系體積為50-200μL，酶濃度需根據活性高低調整。
檢測操作：按照優(yōu)化后的反應體系依次加入試劑，啟動反應后，通過分光光度法、熒光法、比色法等檢測方法，實時或終點檢測底物消耗、產物生成的信號變化。
活性計算：根據檢測到的信號變化值，結合摩爾消光系數、熒光量子產率等參數，計算酶的活性單位（U）；1U定義為在特定條件下，每分鐘催化1μmol底物轉化為產物的酶量。
3. Western Blot檢測
樣品處理：取適量復溶后的蛋白溶液，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；若蛋白含二硫鍵，可添加β-巰基乙醇或DTT輔助變性。
電泳分離：將變性后的樣品加入SDS-PAGE凝膠的上樣孔，同時加入蛋白Marker；先以80V電壓運行濃縮膠（約30分鐘），待樣品進入分離膠后，調整電壓至120V繼續(xù)電泳（約60-90分鐘），直至蛋白Marker分離清晰。
轉膜操作：根據蛋白分子量選擇合適孔徑的PVDF或NC膜；采用濕轉或半干轉法將凝膠中的蛋白轉移至膜上，濕轉條件通常為200-300mA電流，轉膜時間60-120分鐘；轉膜后可通過麗春紅染色確認轉膜效果。
封閉與孵育：用5%脫脂牛奶或BSA溶液封閉膜1-2小時，封閉非特異性結合位點；加入一抗（按說明書推薦比例稀釋），4℃孵育過夜；次日用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘；加入HRP標記的二抗（按說明書推薦比例稀釋），室溫孵育1小時；再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘。
顯色檢測：將膜浸入ECL化學發(fā)光試劑中，避光孵育1-5分鐘；使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)曝光檢測蛋白條帶，根據條帶位置和灰度分析蛋白表達情況。
關鍵字： 人假尿苷酸合酶1;PUS1;重組蛋白;
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