人雙腎上腺皮質(zhì)激素樣激酶3(DCLK3)重組蛋白開(kāi)展絲氨酸 / 蘇氨酸激酶體外活性測(cè)定、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)分子機(jī)制體外研究實(shí)驗(yàn)。
型號(hào)：YS-DB2873
產(chǎn)品名稱(chēng)：人雙腎上腺皮質(zhì)激素樣激酶3(DCLK3)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱(chēng)：Recombinant Doublecortin Like Kinase 3 (DCLK3)
DCAMKL3; DCDC3C; Doublecortin And CaM Kinase-Like 3; Doublecortin domain-containing protein 3C; Serine/threonine-protein kinase DCLK3
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人)
來(lái)源：原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位：：細(xì)胞核, 細(xì)胞質(zhì)
預(yù)測(cè)分子量：55kDa
實(shí)際分子量：55kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))
片段與標(biāo)簽：Met1~Met221 with N-terminal His and GST Tag
緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性狀：凍干粉
純度：> 90%
等電點(diǎn)：9.6
應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測(cè)原理：
ATP 依賴(lài)型絲蘇氨酸磷酸轉(zhuǎn)移反應(yīng)：DCLK3 消耗 ATP，對(duì)特異性多肽底物進(jìn)行位點(diǎn)磷酸化修飾。
熒光激酶底物檢測(cè)體系：磷酸化前后底物熒光極化值改變，通過(guò)熒光極化數(shù)值變化定量 DCLK3 活性。
WB 蛋白分子量與純度鑒定：特異性抗體雜交確認(rèn) DCLK3 重組蛋白表達(dá)無(wú)誤。
家族亞型底物區(qū)分試驗(yàn)：對(duì)比 DCLK1/2 底物活性差異，確認(rèn)檢測(cè)活性歸屬 DCLK3。
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常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景操作指南：
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
濃度優(yōu)化：先設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)梯度（如0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），檢測(cè)細(xì)胞增殖、分化或信號(hào)通路激活情況，確定最優(yōu)工作濃度。
添加時(shí)機(jī)：細(xì)胞接種后24-48小時(shí)，待細(xì)胞貼壁且狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)添加重組蛋白。
更換培養(yǎng)基：若蛋白半衰期較短，需每隔24-48小時(shí)更換含新鮮蛋白的培養(yǎng)基。
免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置：在ELISA或WB實(shí)驗(yàn)中，用已知濃度的重組蛋白制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，確保定量準(zhǔn)確性。
封閉處理：若蛋白用于包被ELISA板，包被后需用5%脫脂牛奶或BSA封閉，降低非特異性結(jié)合。
抗體配對(duì)：選擇針對(duì)不同表位的捕獲抗體和檢測(cè)抗體，避免與重組蛋白的標(biāo)簽產(chǎn)生交叉反應(yīng)。
蛋白相互作用實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽選擇：若使用Pull-down實(shí)驗(yàn)，優(yōu)先選擇GST或His標(biāo)簽的重組蛋白，便于親和層析分離。
反應(yīng)條件：在生理緩沖液（如PBS）中進(jìn)行，溫度控制在4℃，避免蛋白變性。
陰性對(duì)照：設(shè)置不含目標(biāo)蛋白的對(duì)照組，排除標(biāo)簽非特異性結(jié)合的干擾。
關(guān)鍵字： 人雙腎上腺皮質(zhì)激素樣激酶3;DCLK3;重組蛋白;
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