雙抗體夾心 ELISA 體系，微孔板固定抗 E-Selectin 捕獲抗體，樣本內(nèi)皮活化標(biāo)志物 E 選擇素結(jié)合板底，酶標(biāo)記檢測抗體形成夾心結(jié)構(gòu)，洗板顯色讀數(shù)，定量炎癥內(nèi)皮黏附分子水平。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E1288 |
英文名稱 | Rat E-Selectin ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測靈敏度0.07ng/mL，適配大鼠微量E選擇素檢測
檢測范圍：0.1ng/mL - 95ng/mL，覆蓋大鼠血管炎癥、內(nèi)皮損傷相關(guān)樣本濃度
反應(yīng)時間：總實驗時長125分鐘，樣本孵育65分鐘，酶孵育30分鐘，顯色15分鐘，終止5分鐘
保存條件：2 - 8℃避光冷藏保存，洗滌液室溫存放，標(biāo)準(zhǔn)品密封冷藏
有效期：未開封有效期6個月，開封后1個月內(nèi)用完
顯色系統(tǒng)：穩(wěn)定型TMB顯色系統(tǒng)，顯色梯度均勻穩(wěn)定
檢測波長：450nm主波長檢測，630nm校正
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：6點梯度標(biāo)準(zhǔn)品，四參數(shù)擬合曲線，R2≥0.995
特異性：特異性識別大鼠E-Selectin，與L、P選擇素?zé)o交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%，數(shù)據(jù)穩(wěn)定
注意事項：血漿樣本選用EDTA抗凝，避免肝素干擾；樣本采集后及時離心檢測；孵育濕盒保濕，防止液體蒸發(fā)
通用注意事項：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。
儲存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
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實驗操作流程：
試劑平衡：全套試劑室溫平衡 22min，20 倍濃縮洗滌液稀釋，血管內(nèi)皮上清備用。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：E-Selectin 凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶梯度稀釋 6 濃度，空白調(diào)零孔。
加樣孵育：50μL 標(biāo)準(zhǔn)品 / 樣本 + 50μL HRP 酶抗體，封膜 37℃避光孵育 58min。
洗板操作：洗滌液浸泡 30s，拍干，洗板 5 次。
底物顯色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 13min。
終止讀數(shù)：終止液混勻，8min 內(nèi)檢測 OD450。
數(shù)據(jù)計算：曲線定量 E 選擇素，評價內(nèi)皮炎癥黏附分子表達。
關(guān)鍵字： 大鼠E選擇素;E-Selectin/CD62E;ELISA試劑盒;
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