本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術，預先在酶標板包被大鼠MCP-3特異性捕獲抗體，加入標準品與待測大鼠樣本，樣本中的MCP-3抗原與固相抗體特異性結合，洗板清除未結合物質后，加入HRP標記的MCP-3檢測抗體，形成夾心免疫復合物，經(jīng)充分洗滌后加入TMB底物顯色，酶促反應產(chǎn)生的有色產(chǎn)物濃度與樣本MCP-3含量正相關，終止反應后檢測吸光度，通過標準曲線計算樣本中MCP-3的含量。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA試劑盒

英文名稱：MCP-3 ELISA Kit
貨號：Y-E1501

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢測靈敏度≤1.2pg/mL

檢測范圍：2.5pg/mL - 100pg/mL

反應時間：總反應時長90分鐘（溫育60分鐘、顯色30分鐘）

保存條件：2-8℃避光密封保存，嚴禁冷凍試劑盒組分

有效期：原裝試劑盒12個月有效期

顯色系統(tǒng)：高靈敏度TMB顯色系統(tǒng)，適配低濃度細胞因子檢測

檢測波長：450nm主波長檢測，630nm去除背景干擾

標準曲線繪制：標準品梯度濃度對應吸光度，四參數(shù)Logistic擬合，R2≥0.992

特異性：特異性靶向大鼠MCP-3，無同源蛋白交叉反應

重復性：板內CV≤6%，板間CV≤8%

注意事項：血清樣本需充分凝固離心，避免纖維蛋白殘留；每次實驗需同步繪制標準曲線，不可沿用舊曲線。
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。
實驗步驟如下：

試劑盒全部試劑室溫靜置 32min，洗滌液 1:21 稀釋，大鼠組織上清樣本冰上操作。

各微孔加入 100μL 對應標準品、組織上清、空白稀釋液。

一步混合酶液 100μL / 孔，封板 37℃孵育 55min。

洗滌液浸泡 25s，重復洗滌 3 次，吸干水分。

避光顯色 100μL，37℃孵育 13min。

終止液終止顯色，輕晃混勻。

酶標儀檢測 OD450，定量 MCP-3 含量。
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