本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，預(yù)先在酶標(biāo)板包被大鼠CAMK2特異性單克隆抗體，加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)大鼠細(xì)胞、組織樣本，樣本中的CAMK2抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除非特異性雜質(zhì)，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的CAMK2檢測(cè)抗體，形成免疫復(fù)合物，洗滌后底物顯色，終止后檢測(cè)吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)定量樣本中CAMK2的表達(dá)量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA試劑盒
英文名稱：CAMK 2 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1111
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)靈敏度0.07ng/mL，可精準(zhǔn)檢測(cè)大鼠腦組織、心肌組織中微量CAMK 2
檢測(cè)范圍：0.1ng/mL～10ng/mL，覆蓋大鼠神經(jīng)、心肌損傷模型CAMK 2表達(dá)區(qū)間
反應(yīng)時(shí)間：總實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)115分鐘，抗體孵育85分鐘，顯色反應(yīng)30分鐘
保存條件：2～8℃避光冷藏保存，酶結(jié)合物單獨(dú)密封存放，避免失活
有效期：未拆封有效期6個(gè)月，開(kāi)封后25天內(nèi)用完試劑
顯色系統(tǒng)：優(yōu)化TMB顯色體系，反應(yīng)靈敏，微量蛋白可清晰顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)波長(zhǎng)，600nm校正波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：6梯度標(biāo)準(zhǔn)濃度，四參數(shù)邏輯擬合，R2≥0.995，線性關(guān)系穩(wěn)定
特異性：特異性結(jié)合大鼠CAMK 2蛋白，與CAMK1、CAMK4等同家族激酶無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤4%，板間CV≤6%，檢測(cè)數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠
注意事項(xiàng)：組織樣本需充分裂解、離心取上清，避免雜質(zhì)干擾；實(shí)驗(yàn)全程低溫避光，防止蛋白降解；孵育溫度嚴(yán)格37℃恒定；終止后立即上機(jī)讀數(shù)，避免數(shù)值波動(dòng)。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見(jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒提前 30min 室溫復(fù)溫，洗滌液 1:23 稀釋，大鼠腦組織裂解上清全程低溫操作。
酶標(biāo)板每孔添加 100μL CAMK2 重組標(biāo)準(zhǔn)蛋白、腦上清、空白稀釋液。
酶標(biāo)捕獲抗體 100μL / 孔，覆膜 37℃孵育 77min。
洗滌浸泡 34s，洗 4 次，拍干微孔水分。
避光顯色液 100μL，37℃顯色 17min。
滴加終止液充分混勻微孔液體。
酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)吸光度，定量 CAMK2 激酶表達(dá)量。
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關(guān)鍵字： 大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2;CAMK 2;ELISA試劑盒;
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