本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)原理，用于大鼠Cyclin-D1的定量檢測(cè)。酶標(biāo)板微孔內(nèi)包被大鼠Cyclin-D1特異性捕獲抗體，樣本中的Cyclin-D1抗原與固相抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成穩(wěn)定夾心免疫復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合組分后進(jìn)行底物顯色，顯色深淺與樣本中Cyclin-D1含量呈正相關(guān)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確測(cè)定其含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒
英文名稱：Rat Cyclin-D1 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1351
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤1.8pg/mL
檢測(cè)范圍：3.5pg/mL - 140pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：全程140分鐘，分步孵育80分鐘、40分鐘，顯色20分鐘
保存條件：2-8℃避光冷藏，抗體試劑單獨(dú)存放
有效期：原裝有效期8個(gè)月，開(kāi)封后15天內(nèi)用完
特異性：特異性識(shí)別大鼠Cyclin-D1，與D2、D3亞型交叉反應(yīng)率＜3%
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%
注意事項(xiàng)：細(xì)胞樣本需充分裂解，保證蛋白釋放；避免高溫環(huán)境，周期蛋白易高溫變性。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見(jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
微孔板室溫回溫 25min，梯度稀釋 Cyclin-D1 標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞裂解樣本稀釋上樣，空白孔僅稀釋液，每孔 50μL。
每孔加入酶標(biāo)記一抗復(fù)合物 50μL，密封酶標(biāo)板，37℃孵育 69min。
洗板 5 輪，每輪加滿洗滌液靜置 30s，倒扣拍干。
顯色 A、B 液各 50μL 混勻添加，避光顯色 19min。
加入終止液 50μL 終止酶促顯色。
酶標(biāo)儀 450nm 檢測(cè)吸光度值。
標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計(jì)算樣本 Cyclin-D1 濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠細(xì)胞周期素D1;Cyclin-D1;ELISA試劑盒;
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