本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，針對(duì)大鼠TAFI建立特異性檢測(cè)體系。酶標(biāo)板包被TAFI特異性捕獲抗體，待測(cè)樣本中的TAFI抗原與固相抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成夾心復(fù)合物，洗滌去除游離組分后進(jìn)行底物顯色。樣本中TAFI濃度越高，顯色產(chǎn)物越多、吸光度越高，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可完成精準(zhǔn)定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒
英文名稱：TAFI ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1210
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤2.8pg/mL
檢測(cè)范圍：5.5pg/mL - 240pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：全程130分鐘，分步孵育70分鐘、40分鐘，顯色20分鐘
保存條件：2-8℃密封冷藏，所有試劑避光存放
有效期：原裝有效期8個(gè)月，開封后15天內(nèi)完成檢測(cè)
特異性：特異性結(jié)合大鼠TAFI蛋白，與凝血酶、纖溶相關(guān)因子無交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤5%，板間CV≤7%
注意事項(xiàng)：避免凝血不完全樣本，雜質(zhì)會(huì)干擾抗原抗體結(jié)合；實(shí)驗(yàn)耗材需無凝血污染。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
板條室溫靜置 36min，梯度稀釋 TAFI 標(biāo)準(zhǔn)品，血漿樣本稀釋預(yù)處理，空白孔補(bǔ)稀釋液，每孔 50μL。
每孔加入酶標(biāo)記抗體復(fù)合物 50μL，封板封口，37℃孵育 82min。
洗板 5 次，每次浸泡 41s，徹底清除未結(jié)合游離組分。
顯色底物 A、B 各 50μL 依次加入，避光顯色 25min。
加入終止液 50μL 終止顯色反應(yīng)。
450nm 波長(zhǎng)酶標(biāo)儀測(cè)定各孔 OD 值。
標(biāo)準(zhǔn)曲線定量換算稀釋比例，得到 TAFI 樣本含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物;TAFI;ELISA試劑盒;
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