本試劑盒基于競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，適配大鼠氫化可的松（HYD）的微量定量檢測。微孔板預(yù)包被HYD特異性抗原，檢測時樣本中的內(nèi)源性氫化可的松與固相抗原競爭結(jié)合酶標(biāo)特異性抗體，恒溫孵育后洗板去除所有未特異性結(jié)合的組分。后續(xù)底物經(jīng)酶催化產(chǎn)生顯色信號，顯色深淺與樣本中HYD濃度呈負(fù)相關(guān)，反應(yīng)終止后讀取吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可準(zhǔn)確計(jì)算大鼠樣本中氫化可的松的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度0.09ng/mL，可檢出大鼠體內(nèi)微量氫化可的松基礎(chǔ)及應(yīng)激表達(dá)水平。

檢測范圍：0.25ng/mL - 18ng/mL，覆蓋大鼠內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、應(yīng)激損傷、免疫異常模型濃度區(qū)間。

反應(yīng)時間：標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)時長120分鐘，恒溫分段孵育，結(jié)合更充分。

保存條件：2 - 8℃冷藏避光保存，所有試劑禁止冷凍，避免激素抗體失活。

有效期：未拆封試劑盒有效期12個月，穩(wěn)定性優(yōu)異。

特異性：特異性結(jié)合大鼠氫化可的松，與其他糖皮質(zhì)激素交叉反應(yīng)率＜1%。

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤4.8%，板間CV≤6.8%，檢測精度高、誤差小。

注意事項(xiàng)：樣本采集后快速分離血清，避免激素降解；孵育溫度嚴(yán)格恒定；終止后及時上機(jī)讀數(shù)，避免顏色衰減。
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

1. 試劑室溫復(fù)溫 30min，配制洗滌工作液；大鼠血漿樣本低速離心去除脂類漂浮物。

2. 酶標(biāo)板區(qū)分空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔加梯度 HYD 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加待測血漿 50μL。

3. 一步法同步加入酶結(jié)合物工作液 100μL，封板封口防止液體蒸發(fā)。

4. 37℃避光孵育 60min，全程不移動酶標(biāo)板。

5. 揭開封板，棄液洗板，每孔浸泡 32s，重復(fù)洗板 5 次，拍干微孔。

6. 加入顯色 A、B 液各 50μL，輕晃混勻，37℃避光顯色 15min。

7. 加入終止液混勻終止反應(yīng)，450nm 測定 OD 值，換算氫化可的松樣本濃度。