本試劑盒運用雙抗體夾心ELISA核心原理檢測大鼠趨化因子（fractalkine/CX3CL1），酶標板微孔內包被純化的CX3CL1特異性捕獲抗體。加入待測樣本和梯度標準品后，樣本中的靶標抗原與固相抗體特異性結合，孵育洗板后加入酶標記檢測抗體，形成完整的免疫夾心復合物。洗板去除游離物質后進行底物顯色，吸光度值與樣本中CX3CL1的含量呈正相關，通過標準曲線回歸分析，可精準定量大鼠趨化因子的濃度。
產品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測值0.1pg/mL，超高靈敏度適配微量趨化因子檢測。

檢測范圍：0.3pg/mL - 160pg/mL，適配大鼠炎癥浸潤、免疫趨化、腫瘤轉移模型。

反應時間：全流程反應150分鐘，長時間孵育保障低豐度細胞因子結合完全。

保存條件：2 - 8℃避光密封保存，抗體組分單獨存放，避免污染失活。

有效期：原裝試劑盒有效期6個月，低溫恒定保存活性穩(wěn)定。

特異性：特異性識別大鼠CX3CL1趨化因子，與其他趨化因子家族蛋白無交叉反應。

重復性：板內CV≤5.8%，板間CV≤7.8%，實驗重復性良好。

注意事項：細胞上清、組織勻漿樣本需充分離心除雜；樣本避免反復凍融，防止細胞因子降解；溫育過程杜絕孔板干燥。
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

1. 試劑盒試劑室溫放置 29min，稀釋洗滌濃縮液；細胞培養(yǎng)上清樣本離心去除懸浮細胞。

2. 排布酶標板孔位，標準品孔加入梯度 CX3CL1 標準品 50μL，樣本孔加入待測上清 50μL，空白孔無加樣。

3. 檢測孔加入酶標記二抗工作液 100μL，封板膜密封嚴實。

4. 37℃避光孵育 66min，完成一步法免疫復合物結合。

5. 倒掉孔內液體，洗滌液浸泡 30s，洗板 5 次，倒置拍干微孔殘留洗液。

6. 依次添加顯色 A、B 液各 50μL，震蕩混勻，37℃避光顯色 17min。

7. 終止液終止底物反應，450nm 讀取吸光度值，依據標準曲線定量趨化因子含量。