本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA檢測原理，將純化的大鼠PEDF特異性單克隆抗體固定于酶標(biāo)板微孔作為固相載體。加入待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品后，其中的PEDF抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)，再加入酶標(biāo)記的PEDF多克隆抗體，形成特異性夾心免疫復(fù)合物。經(jīng)TMB底物顯色、酸性溶液終止反應(yīng)后，檢測吸光度值，其數(shù)值與樣本中PEDF含量呈正相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量分析大鼠PEDF的表達(dá)水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測下限0.18ng/mL，可檢出極低濃度PEDF蛋白。

檢測范圍：0.4ng/mL - 80ng/mL，適用于大鼠眼組織、血清、腦組織勻漿樣本。

反應(yīng)時間：全程105分鐘，抗原溫育45分鐘、酶標(biāo)抗體溫育35分鐘、顯色25分鐘。

保存條件：2-8℃密封冷藏，顯色液單獨避光保存，避免氧化失效。

有效期：未開封有效期10個月，開蓋后組分2周內(nèi)用完最佳。

特異性：僅識別大鼠PEDF，與血管內(nèi)皮生長因子等眼部調(diào)控因子無交叉反應(yīng)。

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7%，板間CV≤9%，實驗重復(fù)性穩(wěn)定可靠。

注意事項：眼組織樣本需低溫快速處理，防止蛋白降解；溫育溫度波動不超過±1℃。
試劑盒組成：

預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物

標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)

生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點

辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化

終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果

濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)

封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒室溫放置 32min，配制洗滌工作液，梯度制備 PEDF 標(biāo)準(zhǔn)品溶液，拆分酶標(biāo)板條并標(biāo)注孔位類型，制備大鼠組織上清待測樣本。

標(biāo)準(zhǔn)品孔加入梯度 PEDF 標(biāo)準(zhǔn)液 50μL，樣本孔加入預(yù)處理待測樣本 50μL，空白孔加基礎(chǔ)稀釋液 50μL，每孔加入酶標(biāo)抗體工作液 100μL，封膜封口。

37℃避光孵育 62min，固相載體完成抗原夾心捕獲。

撕掉封板膜傾倒廢液，洗滌液浸泡每孔 32s 后甩干，連續(xù)洗板 5 次，拍干板條多余液體。

每孔分別添加顯色液 A、B 各 50μL，混勻后 37℃避光顯色 17min。

滴加終止液 50μL 終止酶促顯色，小幅振蕩酶標(biāo)板混勻。

450nm 波長檢測 OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算 PEDF 樣本濃度。