本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，預(yù)先將純化的大鼠IGFBP-4特異性抗體包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi)，形成固相抗體，向微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)大鼠樣本，樣本中的IGFBP-4抗原可與固相抗體特異性結(jié)合，充分洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記的特異性二抗，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的免疫復(fù)合物，再次洗滌后加入底物顯色液進(jìn)行顯色反應(yīng)，在一定濃度范圍內(nèi)，樣本中IGFBP-4含量與顯色深淺呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定對(duì)應(yīng)吸光度值，即可結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣本中IGFBP-4的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：IGFBP-4 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1543
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度0.15ng/mL
檢測(cè)范圍：0.3ng/mL - 10ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：全程120分鐘（溫育分兩步，樣本孵育60min，酶標(biāo)孵育30min，顯色30min）
保存條件：試劑盒未開(kāi)封2-8℃冷藏保存，嚴(yán)禁冷凍；開(kāi)封后板條密封2-8℃存放
有效期：未開(kāi)封儲(chǔ)存有效期6個(gè)月
特異性：特異性識(shí)別大鼠IGFBP-4，與大鼠IGFBP-1、IGFBP-3等同源蛋白無(wú)交叉反應(yīng)，與小鼠、兔同源蛋白輕微交叉可忽略
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤6%，板間變異系數(shù)CV≤8%
注意事項(xiàng)：樣本需新鮮分離，避免反復(fù)凍融；溫育過(guò)程需避光、恒溫，避免溫度波動(dòng)影響檢測(cè)結(jié)果；洗滌需充分，防止非特異性結(jié)合干擾數(shù)值
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，定量檢測(cè)依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過(guò)程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
取出試劑盒室溫平衡 30min，配制洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液、樣本稀釋液，標(biāo)記酶標(biāo)板孔位，設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔。
空白孔不加任何液體，標(biāo)準(zhǔn)品孔每孔加入對(duì)應(yīng)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，待測(cè)樣本孔先加樣本稀釋液 40μL，再加入 10μL 待測(cè)大鼠血清 / 組織上清樣本，輕柔晃動(dòng)酶標(biāo)板混勻。
每孔直接加入一步法酶結(jié)合物工作液 100μL，封板膜密封酶標(biāo)板，37℃恒溫孵育 60min。
揭去封板膜，棄去孔內(nèi)全部液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液靜置 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，最后一次拍凈孔內(nèi)殘留液體。
每孔依次加入顯色液 A、顯色液 B 各 50μL，避光環(huán)境下 37℃避光顯色 15min。
每孔快速加入終止液 50μL 終止顯色反應(yīng)，輕晃酶標(biāo)板混勻。
15min 內(nèi)使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔 OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與對(duì)應(yīng) OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣本中 IGFBP-4 含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4;IGFBP-4;ELISA試劑盒;
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