本試劑盒采用競爭法ELISA檢測原理，酶標(biāo)板微孔包被有大鼠乙酰膽堿特異性抗原，實驗過程中，樣本中的Ach與固相包被抗原競爭性結(jié)合有限的酶標(biāo)記特異性抗體，樣本中乙酰膽堿含量越高，結(jié)合在固相載體上的酶標(biāo)抗體就越少，后續(xù)加入底物顯色后的顯色深度越淺，通過檢測吸光度值，依據(jù)競爭抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可反向定量計算出大鼠待測樣本中Ach的含量。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：大鼠乙酰膽堿(Ach)ELISA試劑盒

英文名稱：ACH ELISA Kit
貨號：Y-E1426

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢測濃度0.2nmol/L

檢測范圍：0.5nmol/L - 20nmol/L

反應(yīng)時間：全程130分鐘（樣本孵育70min，酶標(biāo)孵育30min，顯色30min）

保存條件：2-8℃避光密封保存，乙酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)品-20℃凍存

有效期：未開封儲存有效期9個月

特異性：特異性檢測大鼠乙酰膽堿，與膽堿、乙酰膽堿酯酶無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤6%，板間變異系數(shù)CV≤9%

注意事項：神經(jīng)組織樣本需快速處理，防止Ach降解；實驗全程避光，避免物質(zhì)氧化；樣本避免反復(fù)凍融，保證活性穩(wěn)定
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：

試劑盒室溫平衡 30min，稀釋洗滌液，逐級配制 Ach 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋體系，標(biāo)記酶標(biāo)板各類檢測微孔。

標(biāo)準(zhǔn)孔加入梯度乙酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，待測孔加入 50μL 大鼠腦組織上清樣本，空白孔不加試劑。

所有檢測孔加入一步法酶結(jié)合抗原工作液 100μL，封板膜密封，37℃孵育 52min。

棄去孔中廢液，洗滌液加滿靜置 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，吸干孔底殘液。

每孔添加顯色液 A、B 各 50μL，避光 37℃顯色 16min。

逐孔加入終止液 50μL 終止顯色反應(yīng)，輕晃板面混勻。

酶標(biāo)儀 450nm 測 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測算樣本乙酰膽堿 Ach 含量。
公司正在出售的產(chǎn)品：