本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA原理檢測大鼠組織及細(xì)胞樣本中GR-α含量。酶標(biāo)板固相載體包被純化的大鼠GR-α特異性抗體，溫育過程中捕獲樣本中的GR-α抗原，洗板去除非特異性結(jié)合成分后，加入HRP標(biāo)記的GR-α特異性檢測抗體，形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后檢測吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量大鼠GR-α的表達(dá)水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測限0.1ng/mL，精準(zhǔn)檢測大鼠細(xì)胞、組織中GR-α受體蛋白含量。

檢測范圍：0.2ng/mL - 10ng/mL，適配大鼠內(nèi)分泌、應(yīng)激模型樣本檢測。

反應(yīng)時(shí)間：全程100分鐘，恒溫孵育70分鐘，酶標(biāo)反應(yīng)20分鐘，顯色10分鐘。

保存條件：受體抗體試劑2-8℃避光冷藏，嚴(yán)禁凍融，標(biāo)準(zhǔn)品單獨(dú)密封保存。

有效期：原裝有效期7個(gè)月，開封后20天內(nèi)使用完畢。

特異性：專一識別大鼠GR-α亞型，與GR-β亞型無交叉反應(yīng)，亞型區(qū)分度高。

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤5.2%，板間CV≤6.8%，受體蛋白檢測數(shù)據(jù)精準(zhǔn)。

注意事項(xiàng)：樣本需避免激素污染，實(shí)驗(yàn)全程低溫操作，防止受體蛋白降解。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫靜置 28min，稀釋洗滌液，逐級稀釋 GR-α 標(biāo)準(zhǔn)品，拆分酶標(biāo)板條，未用板條密封避光低溫儲存。

標(biāo)記酶標(biāo)板各組孔位，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，待測孔加入組織 / 血清待測樣本 50μL，空白孔不加試劑。

非空白孔添加酶偶聯(lián)工作液 100μL，封板密封，37℃孵育 66min。

傾倒廢液，洗滌液浸泡每孔 30s 后拍干，重復(fù)洗板 5 次。

加入顯色底物 A、B 各 50μL，混勻避光，37℃顯色 16min。

滴加終止液 50μL 混勻終止反應(yīng)。

酶標(biāo)儀 450nm 測定 OD 值，計(jì)算樣本 GR-α 濃度。