本試劑盒采用經典雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測原理，酶標板微孔內包被有純化的大鼠omentin特異性捕獲抗體。檢測時，樣本中的omentin抗原與固相捕獲抗體特異性結合，洗去未結合雜質后，加入酶標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體夾心復合物。后續(xù)通過底物顯色、終止反應，樣本中omentin含量越高，顯色反應產物濃度越高，吸光度數(shù)值越大，通過標準曲線回歸計算，可精準定量大鼠樣本中的omentin水平。
產品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤1.5pg/mL

檢測范圍：3pg/mL - 120pg/mL

反應時間：總時長150分鐘，三步溫育依次為60分鐘、40分鐘、20分鐘

保存條件：所有試劑2-8℃避光密封保存，禁止冷凍，洗滌液常溫密封存放

有效期：未開封有效期10個月，開封后15天內用完

特異性：特異性針對大鼠網膜素，與脂聯(lián)素、瘦素等脂肪細胞因子無交叉反應

重復性：板內CV≤4%，板間CV≤6%，檢測精準度高

注意事項：樣本避免反復凍融，否則會導致網膜素蛋白降解；加樣需精準快速，減少孔內液體揮發(fā)；終止液加入順序需統(tǒng)一，避免顯色差異。
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

試劑盒所有試劑室溫平衡 20min，配置梯度標準品，樣本離心取上清稀釋，空白孔加稀釋液，每孔加樣 45μL。

每孔加入酶標抗體 55μL，封板后 37℃恒溫孵育 50min。

洗板液注滿每孔，浸泡 35s 后倒掉，重復洗板 5 次，孔內無殘留廢液。

每孔加顯色液 A 50μL、顯色液 B 50μL，避光輕晃混勻，37℃顯色 18min。

加入終止液 50μL 混勻終止反應。

酶標儀 450nm 讀取 OD 值，3-5 分鐘內完成檢測。

標準曲線定量，核算稀釋倍率，得出樣本網膜素含量。