導讀： 大腸埃希菌是臨床最常見的革蘭陰性致病菌之一，也是藥敏試驗質(zhì)控體系中的關(guān)鍵參考菌種。ATCC 25922作為一株不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的敏感型大腸埃希菌，同時適用于K-B紙片法和MIC肉湯稀釋法兩種藥敏方法的質(zhì)控。本文從QC工程師的工作實踐出發(fā)，詳解該菌株的特性、操作要點及在CLSI M100標準中的應(yīng)用。
菌株基本信息
ATCC 25922是藥敏質(zhì)控領(lǐng)域使用頻率最高的大腸埃希菌標準菌株之一。它與ATCC 35218形成配對關(guān)系：25922為敏感株（不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶），35218為產(chǎn)酶株（產(chǎn)TEM-1型β-內(nèi)酰胺酶）。兩者搭配使用，可全面覆蓋革蘭陰性菌藥敏試驗的質(zhì)控需求。
| 項目 | 內(nèi)容 |
|------|------|
| 學名 | Escherichia coli |
| ATCC編號 | 25922 |
| 生物安全等級 | BSL-1 |
| 推薦培養(yǎng)基 | MHA（紙片法）/ CAMHB（MIC法） |
| 培養(yǎng)溫度 | 35±2°C |
| 培養(yǎng)時間 | 16-18小時 |
| 關(guān)鍵特征 | 不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶，對多數(shù)抗生素敏感 |
生物學特性與形態(tài)
ATCC 25922為革蘭陰性短桿菌，在MHA平板上35°C培養(yǎng)18小時后，菌落呈灰白色、光滑、濕潤，直徑約2-3mm。生化鑒定：氧化酶陰性、吲哚陽性、甲基紅陽性、V-P陰性、枸櫞酸鹽陰性——這是大腸埃希菌的經(jīng)典IMViC反應(yīng)模式（++--）。
該菌株不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶（blaTEM陰性、blaSHV陰性），不含ESBL基因，對氨芐西林、頭孢菌素類、氟喹諾酮類等常用抗生素均表現(xiàn)為敏感。這一"全敏感"特性使其在質(zhì)控中扮演的角色類似ATCC 25923之于金黃色葡萄球菌——質(zhì)控參數(shù)應(yīng)落在CLSI規(guī)定的窄范圍內(nèi)，任何偏離都提示試驗系統(tǒng)可能存在問題。
筆者在工作中發(fā)現(xiàn)，ATCC 25922的生長速度比金黃色葡萄球菌稍快，在MHA上16小時即可獲得良好的菌落。但要注意培養(yǎng)時間不宜超過20小時，過長的培養(yǎng)可能導致部分藥物（如碳青霉烯類）的抑菌圈因藥物降解而偏小。
培養(yǎng)條件與操作要點
K-B法操作
操作規(guī)范與金黃色葡萄球菌K-B法基本一致：
從MHA平板挑取3-5個新鮮菌落，懸浮于生理鹽水中，調(diào)整濁度至0.5號麥氏標準
用無菌棉簽在MHA平板上密涂三遍（每次旋轉(zhuǎn)60°）
室溫放置3-5分鐘，貼抗生素紙片
35°C培養(yǎng)16-18小時后讀取抑菌圈直徑
特別注意： 大腸埃希菌的0.5號麥氏標準對應(yīng)的菌液濃度約為1-2×10? CFU/mL，與金黃色葡萄球菌基本一致。但由于大腸埃希菌在生理鹽水中的懸浮穩(wěn)定性略差，制備菌懸液后應(yīng)盡快完成涂布（建議30分鐘內(nèi)）。
MIC法操作
使用CAMHB培養(yǎng)基，接種濃度5×10? CFU/mL，35°C培養(yǎng)16-20小時。操作方法與ATCC 29213的MIC法質(zhì)控一致。
在各標準中的應(yīng)用
CLSI M100中的應(yīng)用
ATCC 25922是CLSI M100同時指定用于K-B法和MIC法的大腸埃希菌質(zhì)控菌株。
K-B法質(zhì)控抑菌圈范圍：
| 抗生素 | 紙片含量 | 抑菌圈范圍(mm) |
|--------|----------|---------------|
| 氨芐西林 | 10μg | 15-22 |
| 頭孢唑林 | 30μg | 23-29 |
| 頭孢噻肟 | 30μg | 34-42 |
| 頭孢他啶 | 30μg | 25-32 |
| 環(huán)丙沙星 | 5μg | 30-40 |
| 慶大霉素 | 10μg | 19-26 |
| 復方新諾明 | 1.25/23.75μg | 24-34 |
| 亞胺培南 | 10μg | 26-34 |
MIC法質(zhì)控范圍（μg/mL）：
| 抗生素 | MIC范圍 |
|--------|---------|
| 氨芐西林 | 2-8 |
| 頭孢噻肟 | 0.015-0.12 |
| 頭孢他啶 | 0.06-0.5 |
| 環(huán)丙沙星 | 0.004-0.015 |
| 慶大霉素 | 0.25-1 |
| 亞胺培南 | 0.06-0.5 |
| 美羅培南 | 0.008-0.06 |
| 哌拉西林/他唑巴坦 | 1/4-8/4 |
與ATCC 35218的配對使用
CLSI M100明確規(guī)定：對于β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復合藥物（如阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦），質(zhì)控應(yīng)使用ATCC 35218（產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶株）。而對于不含抑制劑的單方β-內(nèi)酰胺類藥物，質(zhì)控使用ATCC 25922（敏感株）。兩者在質(zhì)控設(shè)計中互為補充。
歐洲藥典與中國藥典
EP 2.7.2（微生物學檢查-抗菌藥物敏感性試驗）和中國藥典2020版中，大腸埃希菌的藥敏質(zhì)控參考菌株選擇通常遵循CLSI或EUCAST的推薦標準。
行業(yè)質(zhì)控用途
常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控： 臨床實驗室開展革蘭陰性桿菌藥敏試驗時，ATCC 25922是最基本的質(zhì)控菌株之一，與ATCC 27853（銅綠假單胞菌）搭配覆蓋革蘭陰性菌的主要質(zhì)控范圍。
培養(yǎng)基與紙片批次驗證： 每批新到MHA平板和抗生素紙片均須用ATCC 25922驗證合格后方可投入使用。
自動化藥敏系統(tǒng)校驗： Vitek 2、MicroScan等自動化系統(tǒng)在定期校驗中，ATCC 25922是革蘭陰性菌模塊的標準質(zhì)控菌。
新藥體外評價： 在抗菌新藥研發(fā)中，ATCC 25922是體外藥敏試驗的標準參考菌株之一。
菌種保藏與管理
凍干管在2-8°C長期保存。復蘇后在MHA平板上傳代培養(yǎng)，制備工作菌種保存于MHA斜面（2-8°C，不超過4周）或-80°C甘油凍存管（不超過12個月）。
傳代次數(shù)控制在5代以內(nèi)。每批新工作菌種應(yīng)通過生化試驗（或MALDI-TOF）確認菌種身份，并做β-內(nèi)酰胺酶檢測（頭孢硝噻吩試驗應(yīng)為陰性）以驗證其敏感株特性。
安全注意事項
ATCC 25922為BSL-1級別，是所列質(zhì)控菌株中安全性最高的。大腸埃希菌的絕大多數(shù)菌株屬于人體腸道正常菌群，但在實驗室高濃度操作時仍應(yīng)注意基本防護。
建議在生物安全柜或至少在有物理屏障的環(huán)境下操作。穿戴實驗服和手套。廢棄物高壓滅菌處理。
常見問題與工程師建議
Q1：ATCC 25922的亞胺培南抑菌圈偏?。ǖ陀?6mm），可能原因是什么？
碳青霉烯類藥物在MHA中的穩(wěn)定性受鋅離子影響。如果MHA中Zn2?含量過高，亞胺培南的抑菌圈可能偏小。建議檢查MHA平板的批號和質(zhì)控證書中的陽離子含量。此外，亞胺培南紙片應(yīng)在有效期內(nèi)使用，且儲存溫度嚴格保持2-8°C。
Q2：為什么大腸埃希菌需要兩個質(zhì)控菌株（25922和35218）？
這是因為β-內(nèi)酰胺類藥物在敏感株和產(chǎn)酶株上的表現(xiàn)完全不同。敏感株（25922）用于驗證培養(yǎng)基和操作系統(tǒng)的準確性；產(chǎn)酶株（35218）用于驗證抑制劑復合藥物的有效性。兩者缺一不可，共同構(gòu)成革蘭陰性菌β-內(nèi)酰胺類藥物藥敏質(zhì)控的完整體系。
Q3：BSL-1菌株可以在普通實驗臺上操作嗎？
雖然ATCC 25922的生物安全等級較低，但筆者仍建議在生物安全柜中操作。原因有二：一是避免操作過程中氣溶膠擴散污染實驗室環(huán)境；二是防止環(huán)境中其他微生物污染質(zhì)控菌株。良好的操作習慣是保證質(zhì)控結(jié)果可靠性的基礎(chǔ)。
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免責聲明： 本文所述菌株信息及技術(shù)參數(shù)均來源于ATCC官網(wǎng)、CLSI M100標準、美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、《中國藥典》2020年版、ISO國際標準及《消毒技術(shù)規(guī)范》等公開權(quán)威資料，僅供專業(yè)技術(shù)參考。具體實驗操作請以產(chǎn)品隨附的質(zhì)檢報告(COA)和說明書為準，并嚴格遵守所在機構(gòu)的生物安全管理制度。本文不構(gòu)成任何產(chǎn)品推薦或使用建議。
關(guān)鍵詞標簽: ATCC 25922, 大腸埃希菌, Escherichia coli, 藥敏質(zhì)控, K-B法, MIC法, CLSI M100, BSL-1, β-內(nèi)酰胺酶陰性, 標準菌株
關(guān)鍵字： ** ATCC 25922;大腸埃希菌;Escherichia coli;藥敏質(zhì)控;K-B法;
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