本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理,酶標(biāo)板微孔包被人真胰島素特異性單克隆抗體,加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測生物樣本后,樣本中的真胰島素抗原與固相抗體特異性結(jié)合,洗板去除未結(jié)合雜質(zhì),加入酶標(biāo)記真胰島素檢測抗體形成夾心免疫復(fù)合物,底物顯色、終止反應(yīng)后,檢測各孔吸光度,根據(jù)顯色強(qiáng)度與TI含量的正相關(guān)關(guān)系,定量檢測樣本中真胰島素濃度。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:人真胰島素(TI)ELISA試劑盒
英文名稱:TI Elisa Kit
貨號:Y-E638
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最小檢測 0.15μIU/mL
檢測范圍:0.3μIU/mL - 19.2μIU/mL
反應(yīng)時間:孵育分三次,32min、32min、12min
保存條件:試劑盒 2~8℃,胰島素標(biāo)準(zhǔn)品極易失活,開封后盡快用完
顯色系統(tǒng):TMB A、B 液等量混合顯色
檢測波長:450nm,630nm 校背景
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:線性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,精準(zhǔn)定量胰島素活性濃度
注意事項:樣本嚴(yán)禁高溫放置,胰島素室溫放置超 2h 活性大幅下降
關(guān)鍵注意事項:

實驗前需仔細(xì)閱讀對應(yīng)試劑盒的說明書,不同試劑盒的孵育時間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲存,未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度(通常2-8℃或-20℃)
避免試劑污染,不同組分的移液器槍頭需分開使用
洗板時需確保每孔都被洗滌液覆蓋,防止出現(xiàn)假陽性結(jié)果
顯色過程需避光,避免陽光直射影響結(jié)果
實驗步驟如下:

試劑室溫平衡 30min,梯度稀釋真胰島素 TI 標(biāo)準(zhǔn)品,空腹血清樣本稀釋預(yù)處理,標(biāo)記酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白孔。
空白孔加稀釋緩沖液,標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度 TI 標(biāo)準(zhǔn)液,樣本孔加入稀釋后血清樣本,嚴(yán)格把控加樣體積。
一步法直接添加酶標(biāo)記抗體工作液至所有反應(yīng)孔,手動混勻板內(nèi)液體。
封板膜密封,37℃避光孵育 60min,孵育環(huán)境避光恒溫。
撕開封板倒掉廢液,洗板液洗板 5 次,每次浸泡 30s,充分拍干微孔。
避光滴加顯色底物 AB 液,37℃避光顯色 13min,防止顯色過度。
終止液終止顯色,450nm 讀取 OD 值,標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本真胰島素含量。
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