本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測原理，微孔板預(yù)先包被抗AAV特異性抗體，能夠特異性捕獲樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的腺相關(guān)病毒抗原，孵育充分結(jié)合后洗滌去除孔內(nèi)游離雜質(zhì)，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的AAV檢測抗體，形成穩(wěn)定的夾心免疫復(fù)合物，底物顯色終止后檢測吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)定量檢測樣本中AAV的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人腺相關(guān)病毒(AAV)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E558 |
英文名稱 | AAV Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢出 5×102 vg/mL 病毒基因組
檢測范圍：1×103~6.4×10? vg/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 105min，檢測抗體 70min，顯色 20min
保存條件：試劑盒 2-8℃，AAV 參照品 - 20℃凍存分裝
顯色系統(tǒng)：高靈敏度底物顯色，適合低滴度病毒檢測
檢測波長：450nm 主波長檢測
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：病毒拷貝數(shù)對數(shù)與吸光度值四參數(shù)擬合定量
注意事項(xiàng)：AAV 包裝細(xì)胞裂解液需稀釋合適倍數(shù)，過高濃度易出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑盒室溫平衡 31min，配制一步法雙夾心酶結(jié)合液，設(shè)置陽性對照、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品、空白孔。
每孔先加注酶工作液 60μL，標(biāo)準(zhǔn) / 對照孔加入對應(yīng)質(zhì)控液體 40μL，樣本孔加病毒裂解樣本 40μL，空白孔加稀釋液 40μL。
封板 37℃孵育 57min，傾倒廢液，洗板 4 次，每次浸泡 28s，拍干微孔板。
每孔加入 TMB 顯色底物 100μL 混勻。
室溫避光顯色 10min。
快速滴加終止液 50μL 終止反應(yīng)。
450nm 測 OD 值，判讀 AAV 陽性陰性并定量。
關(guān)鍵字： 人腺相關(guān)病毒;AAV;ELISA試劑盒;
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