本試劑盒運用雙抗體夾心免疫酶標原理，預先在酶標板微孔包被抗人ILK-1特異性抗體，加入待測樣本與梯度標準品，樣本中的整合素連接激酶1與固相捕獲抗體特異性結合，孵育洗滌后加入HRP標記的ILK-1檢測抗體，形成穩(wěn)定的三元免疫復合物，經顯色、終止反應后檢測OD值，結合標準曲線精準定量樣本中ILK-1蛋白的表達量。
基本參數(shù)?：

產品名稱：人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISA試劑盒

英文名稱：ILK-1  Elisa Kit
貨號：Y-E948

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：檢測限 0.11pg/mL

檢測范圍：0.22pg/mL - 14pg/mL

反應時間：總流程 108min，一抗 48min，二抗 40min，顯色 20min

保存條件：未拆分試劑盒 2-8℃避光保存

顯色系統(tǒng)：HRP 催化 TMB 底物顯色

檢測波長：450nm 讀取吸光度

標準曲線繪制：剔除離散異常孔后以四參數(shù)法繪制標準曲線

注意事項：組織勻漿樣本必須充分離心去除組織殘渣再上樣
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：

試劑盒室溫放置 32min，配制 ILK-1 標準品梯度稀釋液，組織細胞裂解上清稀釋待測，標注酶標板微孔組別。

分別向對應孔加入稀釋空白液、梯度標準品、待測裂解樣本，杜絕樣本交叉污染。

直接向全部微孔加入酶標抗體工作液，省略分步孵育，輕搖酶板混勻體系。

封板密封后 37℃濕盒避光孵育 66min，維持孵育濕度。

去除封板傾倒液體，洗板液浸泡每孔 29s，重復洗板 5 次并拍干。

避光加入顯色底物，室溫避光顯色 17min，觀察標準品顏色梯度。

終止液終止反應，酶標儀 450nm 讀數(shù)，計算 ILK-1 激酶蛋白濃度。
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