本試劑盒運用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測原理，微孔板預(yù)先包被抗人ANGⅡR-1特異性抗體，加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本，樣本中的ANGⅡR-1抗原與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌去除非結(jié)合組分，加入HRP標(biāo)記的配對檢測抗體形成夾心復(fù)合物，底物顯色終止后測定OD值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)測算樣本中ANGⅡR-1的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.12ng/mL

檢測范圍：0.25-16ng/mL

反應(yīng)時間：37℃孵育 79min，酶標(biāo)抗體 50min，顯色 13min

保存條件：試劑盒 2-8℃，膜蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 - 20℃凍存

顯色系統(tǒng)：增強(qiáng)型顯色底物降低基質(zhì)干擾

檢測波長：450nm 單波長讀數(shù)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：線性回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線定量受體蛋白含量

注意事項：細(xì)胞膜提取避免過度超聲，超聲破碎會破壞受體蛋白構(gòu)象
實驗前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

試劑盒常溫放置 33min 復(fù)溫，配置一步法酶結(jié)合復(fù)合物液，劃分實驗孔組別。

每孔先加酶混合液 60μL，標(biāo)品孔加梯度 ANGⅡR-1 標(biāo)準(zhǔn)品 40μL，樣品孔加血管內(nèi)皮裂解液 40μL，空白孔加稀釋液 40μL。

封板 37℃孵育 59min，甩凈廢液，洗板 4 次，每次浸泡 26s，倒扣拍干孔板。

每孔加入 TMB 顯色底物 100μL 混勻。

室溫避光顯色 12min。

滴加終止液 50μL 終止酶促顯色。

450nm 測吸光度，擬合曲線定量受體蛋白含量。