本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，將純化的人pFN特異性單克隆抗體包被于酶標(biāo)板微孔，作為固相捕獲位點(diǎn)，加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)血漿樣本后，樣本中的pFN抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合蛋白與雜質(zhì)，加入酶標(biāo)記的pFN檢測(cè)抗體形成夾心免疫復(fù)合物，再次洗滌去除游離酶標(biāo)抗體，加入顯色底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，終止顯色后檢測(cè)各孔吸光度，吸光度數(shù)值與樣本中pFN濃度正相關(guān)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出樣本中pFN的精準(zhǔn)含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低可測(cè) 0.2μg/mL

檢測(cè)范圍：1~64μg/mL

反應(yīng)時(shí)間：樣本室溫孵育 90min，酶標(biāo)抗體 45min，顯色 15min，總 150min

保存條件：試劑盒 2~8℃，已稀釋工作液不可冷藏，需現(xiàn)配現(xiàn)用

顯色系統(tǒng)：?jiǎn)谓M分穩(wěn)定型 TMB 顯色液

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 讀數(shù)，620nm 扣除背景

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7 個(gè)梯度濃度，Logistic 四參數(shù)回歸繪制曲線

注意事項(xiàng)：血漿樣本抗凝劑優(yōu)先選用 EDTA，肝素抗凝易產(chǎn)生非特異性結(jié)合
試劑盒組成：

預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物

標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測(cè)依據(jù)

生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)

辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化

終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果

濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)

封板膜 2張 孵育過(guò)程中防止污染和揮發(fā)

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

血漿樣本處理：分離無(wú)溶血抗凝血漿樣本，用樣本稀釋液稀釋待測(cè)血漿，顛倒混勻 10 次，室溫放置 5min；試劑室溫復(fù)溫 30min。

加樣共孵育：空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣本孔分別加對(duì)應(yīng)液體與酶結(jié)合試劑，覆膜封板，37℃孵育 58min。

洗板流程：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液加滿微孔浸泡 30s，洗板 5 次，拍干微孔殘留洗液。

顯色底物添加：加入顯色 A、B 液，震蕩混勻，避光 37℃顯色 15min。

終止反應(yīng)：加入終止液終止顯色反應(yīng)，輕搖酶標(biāo)板混勻。

酶標(biāo)儀測(cè)值：450nm 波長(zhǎng)讀取各孔 OD 數(shù)值，按編號(hào)記錄。

結(jié)果計(jì)算：擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本稀釋濃度，換算稀釋系數(shù)得到 pFN 血漿濃度，整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。