本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，固相酶標(biāo)板微孔固定人重組激活基因2特異性捕獲抗體，待測樣本與梯度標(biāo)準(zhǔn)品中的RAG-2抗原可與固相抗體特異性結(jié)合，洗板去除游離雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記RAG-2檢測抗體形成免疫復(fù)合物，TMB底物顯色后終止反應(yīng)，檢測OD值并擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，精準(zhǔn)定量樣本中RAG-2蛋白濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人重組激活基因2(RAG-2)ELISA試劑盒
英文名稱：RAG-2 ELISA Kit
貨號：Y-E2969
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最小檢測 0.20pg/mL
檢測范圍：0.4pg/mL - 25.6pg/mL
反應(yīng)時間：總時長 100min，溫育 42min、38min，顯色 20min
保存條件：2～8℃避光密封，標(biāo)準(zhǔn)品分裝凍存使用
顯色系統(tǒng)：即用型單一 TMB 底物液
檢測波長：450nm 單波長讀數(shù)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：線性回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，適用于基因表達(dá)蛋白定量
注意事項：樣本提取過程中添加核酸酶抑制劑，核酸結(jié)合會阻礙抗原抗體結(jié)合
實驗前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實驗步驟如下：
試劑盒室溫平衡 27min，梯度稀釋 RAG-2 標(biāo)準(zhǔn)品，免疫細(xì)胞裂解上清稀釋預(yù)處理，標(biāo)記酶標(biāo)板各微孔用途。
垂直加樣至對應(yīng)微孔，空白孔添加樣本稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品孔加梯度 RAG-2 標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入待測裂解上清。
直接向全部反應(yīng)孔加入酶標(biāo)記特異性抗體工作液，輕拍酶板混勻體系。
封板膜密封酶標(biāo)板，37℃恒溫避光孵育 68min，單層放置不可堆疊擠壓。
棄除孔內(nèi)廢液，洗板液洗板 4 次，每次浸泡 30s，倒扣酶板拍干殘留洗液。
避光滴加顯色 AB 底物液，37℃避光顯色 14min，把控顯色深淺防止過曝。
終止液終止顯色，酶標(biāo)儀 450nm 測 OD 值，換算 RAG-2 基因蛋白濃度。
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關(guān)鍵字： 人重組激活基因2;RAG-2;ELISA試劑盒;
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