本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA核心原理，固相酶標(biāo)板微孔包被抗人周期素依賴性激酶7特異性抗體，加入標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣本后，樣本中的CDK-7抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)，加入HRP標(biāo)記的CDK-7檢測抗體形成夾心免疫復(fù)合物，顯色深淺與CDK-7含量成正比，終止反應(yīng)后檢測OD值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量檢測。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人周期素依賴性激酶7(CDK-7)ELISA試劑盒
英文名稱：CDK-7 Elisa Kit
貨號：Y-E885
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢測限 0.13ng/mL
檢測范圍：0.26ng/mL - 16.64ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總操作 106min，溫育 46min、40min，顯色 20min
保存條件：試劑盒 2～8℃避光密封儲(chǔ)存
顯色系統(tǒng)：HRP-TMB 顯色終止體系
檢測波長：450nm 單波長測定
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)擬合生成標(biāo)準(zhǔn)曲線用于樣本濃度換算
注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白易被核酸干擾，樣本需去除基因組核酸后上樣
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫回溫 30min，倍比稀釋 CDK-7 標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞核蛋白裂解液稀釋待測，標(biāo)注酶標(biāo)板各孔用途。
垂直槍頭加樣，空白孔添加稀釋緩沖液，標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度 CDK-7 標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣本孔加入待測核蛋白樣本。
一步法直接添加酶標(biāo)記抗體工作液至所有微孔，手動(dòng)輕拍酶板混勻孔內(nèi)液體。
封板封口，37℃濕盒避光孵育 64min，維持孵育濕度防止液體濃縮。
去除封板傾倒廢液，洗板液浸泡每孔 28s，重復(fù)洗板 5 次并吸水紙拍干微孔。
避光滴加 TMB 顯色液，室溫避光顯色 14min，觀察梯度色差把控終止時(shí)機(jī)。
終止液終止顯色，450nm 波長讀數(shù)，計(jì)算樣本 CDK-7 表達(dá)濃度。
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關(guān)鍵字： 人周期素依賴性激酶7;CDK-7;ELISA試劑盒;
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