本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標板微孔包被純化的人樁蛋白特異性抗體，加入梯度標準品和待測細胞、組織樣本后，樣本中的Pax抗原與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入酶標記Pax檢測抗體形成完整免疫夾心復(fù)合物，底物顯色后終止反應(yīng)，檢測OD值并對照標準曲線，精準定量樣本中樁蛋白的表達含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人樁蛋白(Pax)ELISA試劑盒
英文名稱：Pax ELISA Kit
貨號：Y-E2943
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出 0.17ng/mL
檢測范圍：0.34ng/mL - 21.76ng/mL
反應(yīng)時間：總操作 110min，捕獲孵育 50min、40min，顯色 20min
保存條件：整套試劑 2～8℃，微孔板拆分后必須密封加干燥劑
顯色系統(tǒng)：TMB A、B 液混合顯色后終止
檢測波長：450nm 參比 630nm
標準曲線繪制：四參數(shù) Logistic 方程繪制標準曲線
注意事項：細胞黏附蛋白樣本避免胰酶過度消化，過度消化會破壞樁蛋白結(jié)構(gòu)
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴禁高溫暴曬。
實驗步驟如下：
試劑盒室溫回溫 31min，倍比稀釋 Pax 樁蛋白標準品，細胞骨架蛋白裂解上清稀釋預(yù)處理，對酶標板孔位編號標記。
垂直槍頭精準加樣，空白孔加稀釋緩沖液，標準孔加梯度 Pax 標準液，樣本孔加入待測裂解上清樣本。
直接向全部反應(yīng)孔加入酶標記特異性抗體工作液，省略分步孵育洗板，輕晃酶板混勻液體。
封板密封后 37℃恒溫避光孵育 65min，酶標板不可堆疊受壓。
去除封板傾倒廢液，洗板液洗板 4 次，每次浸泡 33s，徹底拍干微孔內(nèi)洗滌殘留。
避光滴加顯色 AB 底物液，37℃避光顯色 16min，觀察梯度色差。
終止液終止反應(yīng)，酶標儀 450nm 測定 OD 值，換算樣本樁蛋白 Pax 表達量。
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關(guān)鍵字： 人樁蛋白;Pax;ELISA試劑盒;
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