本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，微孔板預(yù)先包被HBV前S2特異性抗體，加入待測血清樣本與梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本中的前S2抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)，加入酶標(biāo)記前S2抗原檢測抗體形成免疫復(fù)合物，洗滌純化體系后顯色、終止反應(yīng)，檢測吸光度并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量檢測抗原含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出限 8pg/mL

檢測范圍：32~2048pg/mL

反應(yīng)時間：樣本結(jié)合 60min，酶結(jié)合物 45min，顯色 15min，總 120min

保存條件：2~8℃避光，底物液禁止長時間敞口放置氧化失效

顯色系統(tǒng)：單液 TMB 顯色鹽酸終止

檢測波長：450nm 檢測吸光度，650nm 扣除背景

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：五點位標(biāo)準(zhǔn)品，線性回歸構(gòu)建曲線公式

注意事項：重度溶血樣本會破壞抗原表位，造成假陰性結(jié)果
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

血清樣本稀釋處理：乙肝感染者血清稀釋混勻，室溫靜置 12min；試劑盒室溫平衡 33min。

加樣密封孵育：空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣本孔加入標(biāo)準(zhǔn)品、血清樣本與酶標(biāo)記液，覆膜封口，37℃孵育 69min。

洗板去除非特異結(jié)合：洗滌液浸泡微孔 40s，洗板 5 次，徹底拍干微孔廢液。

避光顯色：加入顯色底物液混勻，37℃避光顯色 17min。

終止顯色：滴加終止液終止反應(yīng)并搖勻。

酶標(biāo)儀測 OD：450nm 檢測各孔吸光度逐條記錄。

結(jié)果判讀定量：設(shè)定閾值判定陰陽性，標(biāo)準(zhǔn)曲線計算抗原濃度。