豬藍(lán)耳病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬藍(lán)耳病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus （ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）（又稱豬藍(lán)耳病毒）引起的以成年豬生殖障礙、早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎，以仔豬呼吸異常為特征的傳染病。本病是一種免疫抑制病，常繼發(fā)其他病原感染，病死率極高。
本試劑用于檢測豬血清中豬藍(lán)耳病毒抗體，可用于豬藍(lán)耳病毒疫苗免疫效果評價(jià)。
【原 理】
本試劑盒由預(yù)包被豬藍(lán)耳病毒重組蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬藍(lán)耳病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬藍(lán)耳病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬藍(lán)耳病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
1 | 酶標(biāo)記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
2 | 樣品稀釋液 | 50ml×1(黃蓋) | 50ml×1(黃蓋) | 200ml×1(透明) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(透明) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白蓋) | 11ml×1(白蓋) | 26ml×1(白蓋) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑蓋) | 11ml×1(棕蓋) | 26ml×1(黑蓋) |
6 | 終止液 | 6ml×1(黃蓋) | 11ml×1(黃蓋) | 26ml×1(黃蓋) |
7 | 陽性對照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
8 | 陰性對照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
9 | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
13 | 稀釋板 | 1 | 2 | 5 |
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3，陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.樣品的OD值即ODS；
2.閾值計(jì)算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；
SP值≥0.2，結(jié)果判定為陽性；SP值＜0.2，結(jié)果判定為陰性。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬藍(lán)耳病毒抗體，根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。
關(guān)鍵字： 豬藍(lán)耳病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）;豬藍(lán)耳病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）;酶聯(lián)免疫法;動物酶聯(lián);雅吉Elisa試劑盒;
上海雅吉生物科技的核心業(yè)務(wù)主要圍繞生命科學(xué)研究所需的各類試劑、細(xì)胞、抗體及技術(shù)服務(wù)展開，具體可歸納為以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞產(chǎn)品與技術(shù)平臺：
細(xì)胞產(chǎn)品：提供包括正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞系。同時(shí)，公司也是美國ScienCell等品牌的原代細(xì)胞產(chǎn)品的代理商。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)：公司具備豐富的蛋白表達(dá)研究經(jīng)驗(yàn)，能夠?yàn)榭蛻籼峁幕蛐蛄械椒€(wěn)定細(xì)胞株交付的一站式定制服務(wù)，應(yīng)用于基因功能研究、藥物篩選和重組蛋白生產(chǎn)等領(lǐng)域。
科研試劑：這是公司的基礎(chǔ)和優(yōu)勢業(yè)務(wù)。產(chǎn)品線全面覆蓋了分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和微生物學(xué)等多個(gè)學(xué)科。
ELISA試劑盒：提供人、大鼠、小鼠、犬、魚、雞、牛等多種物種以及植物的ELISA檢測試劑盒，在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中廣泛使用并被科研文獻(xiàn)引用。生化試劑、抗體與血清：提供包括一抗、二抗、單克隆/多克隆抗體在內(nèi)的多種抗體產(chǎn)品，以及胎牛血清等細(xì)胞培養(yǎng)用血清。
蛋白研究相關(guān)試劑盒：提供超過300種針對不同樣本來源（動物、植物、微生物）和不同細(xì)胞器（如線粒體、外泌體）的蛋白提取及檢測試劑盒。