本試劑盒聚焦海豹分支桿菌核酸檢測(cè)，靶向海豹源專(zhuān)屬分枝桿菌基因序列構(gòu)建PCR體系，可精準(zhǔn)檢測(cè)海洋哺乳動(dòng)物樣本中的海豹分支桿菌。產(chǎn)品特異性強(qiáng)、無(wú)其他分枝桿菌交叉反應(yīng)，適用于海洋動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)、水族館動(dòng)物健康檢測(cè)、海洋人畜共患病病原篩查。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 海豹分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014462 |
英文名稱(chēng) | Mycobacterium pinnipediiPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
海洋哺乳動(dòng)物臟器提取分枝桿菌 DNA，靶向海豹分枝桿菌特有間隔基因擴(kuò)增。
探針?biāo)猱a(chǎn)生特異性熒光信號(hào)，無(wú)靶菌則無(wú)熒光。
海水樣本脫鹽緩沖液，去除鹽分對(duì) PCR 體系破壞。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無(wú)核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線(xiàn)分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽(yáng)性：Ct值≤35且熔解曲線(xiàn)峰單一；
陰性：Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線(xiàn)；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測(cè)或結(jié)合熔解曲線(xiàn)分析。
?注意事項(xiàng)?：
所有耗材必須無(wú)核酸酶，吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸??；
陽(yáng)性模板拷貝濃度高，開(kāi)蓋操作輕柔，避免氣溶膠擴(kuò)散造成全域污染；
試劑融化后冰上放置不超過(guò) 2 h，用完立即放回 - 20℃；
廢棄 PCR 管、擴(kuò)增產(chǎn)物、實(shí)驗(yàn)廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄；
試劑盒僅用于動(dòng)植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測(cè)，禁止人體臨床檢測(cè)；
移液器、操作臺(tái)定期紫外消毒，長(zhǎng)期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
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