本試劑盒針對豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲株專屬保守基因設(shè)計特異性擴(kuò)增體系，可精準(zhǔn)定性檢測美洲株病毒核酸，特異性排除歐洲株及其他豬疫病病毒干擾，毒株分型準(zhǔn)確率高。試劑盒反應(yīng)體系穩(wěn)定，檢測速度快，可實現(xiàn)樣本快速批量檢測，適配規(guī)?；i場常態(tài)化篩查需求。適用于國內(nèi)主流美洲株藍(lán)耳病的臨床確診、豬群隱性感染排查、豬場疫病凈化、疫苗免疫效果監(jiān)測及病原流行病學(xué)調(diào)研。
產(chǎn)品名稱 | 豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲株PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014618 |
英文名稱 | Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus North America Strain(PRRSV NA) RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
對豬血液、精液樣本進(jìn)行核酸提取，去除血液中血紅蛋白等抑制成分后反轉(zhuǎn)錄 RNA。
探針識別美洲株獨有基因片段，不會與歐洲株序列發(fā)生雜交結(jié)合。
熒光擴(kuò)增曲線出現(xiàn)有效上升信號即可判定美洲株感染，為毒株分型提供依據(jù)。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實驗后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實驗室；
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實驗室臺面、移液器紫外過夜消毒。
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關(guān)鍵字： 豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲株;PCR檢測試劑盒;
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