本試劑盒基于PCR分子擴(kuò)增技術(shù)，靶向木霉屬真菌共有保守核酸序列設(shè)計(jì)通用擴(kuò)增體系，可精準(zhǔn)檢測(cè)土壤、植物、倉(cāng)儲(chǔ)糧食、環(huán)境樣本中的木霉屬真菌核酸。試劑盒可批量篩查各類木霉污染，靈敏度高，可檢出微量真菌核酸，適用于農(nóng)業(yè)作物真菌病害監(jiān)測(cè)、倉(cāng)儲(chǔ)物資霉變檢測(cè)、土壤微生物污染評(píng)估及環(huán)境真菌防控。
產(chǎn)品名稱 | 木霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014858 |
英文名稱 | Trichoderma spp.PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
提取土壤、植物病斑樣本內(nèi)真菌菌絲 DNA，獲得木霉屬核酸模板；
引物靶向木霉屬真菌 ITS rDNA 保守區(qū)域進(jìn)行屬水平通用擴(kuò)增；
只要樣本含有任意木霉屬物種，即可擴(kuò)增出對(duì)應(yīng)的目標(biāo)核酸片段。
?操作步驟?：
1. 樣本處理
提取待測(cè)樣本RNA，建議使用商品化RNA提取試劑盒。
2. 陽(yáng)性對(duì)照稀釋（示例：6個(gè)梯度）
標(biāo)記離心管（7至2號(hào)），每管加入45μL模板稀釋液。
按10倍梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照，避免交叉污染。
3. PCR反應(yīng)體系配制（20μL/反應(yīng)）
| 組分 | 體積（μL） |
| RT-PCR反應(yīng)液 | 10 |
| 熒光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 補(bǔ)至20 |
4. 上機(jī)程序
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘（可選，根據(jù)病毒RNA特性調(diào)整）。
預(yù)變性：95℃ 2分鐘。
循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)），共40循環(huán)。
?注意事項(xiàng)?：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽(yáng)性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
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